摘要
采用木瓜蛋白酶和糜蛋白酶双酶联合水解坛紫菜蛋白(Porphyra haitanensis protein,PHP)制各降血压活性肽,测定了经超滤后各个分子质量PHP酶解液清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基和2,2'-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)(2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS)阳离子自由基能力、铁离子还原抗氧化能力(ferric ion reducing antioxidant power,FRAP)以及血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制活性.经质谱鉴定和活性肽数据库BIOPEP以及AHTPDB网站查找筛选活性肽,采用分子对接解释多肽抑制ACE机理,并对双酶酶解PHP动力学进行研究.结果 表明:经超滤后的8个分子质量的坛紫菜多肽组分中,＜0.5 kDa的组分具有最高DPPH自由基和ABTS阳离子自由基清除能力,＜1 kDa的组分具有最高FRAP值,而0.5～1 kDa组分IC50值((2.21±0.28) mg/mL)最低.经查找筛选出14条降血压肽,其中4条肽的序列和对接能量分别为AVP(-5.87 kJ/mol)、GPL(-6.13 kJ/mol)、LDY(-7.65 kJ/mol)和LGYL(-7.78 kJ/mol).酶解动力学模型预测PHP水解度与实验水解度相对误差在10％以下.本实验基于串联质谱与分子对接技术,通过生物信息筛选和体外活性检测从混合多肽中快速鉴定、筛选活性多肽,探究多肽抑制ACE的机理,并建立了描述蛋白可控酶解过程规律的动力学模型,为活性肽的制备提供了参考和借鉴.
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