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胰凝乳蛋白酶SplB在枯草芽抱杆菌中的重组表达及应用

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通过启动子优化、宿主筛选,构建了C端带His-tag的胰凝乳蛋白酶类蛋白酶SplB表达载体,成功实现了SplB在枯草芽抱杆菌中的重组表达,对纯化的重组SplB进行酶学性质研究,并实现了重组蛋白酶SplB在重组蛋白Prx标签切割中的应用.结果表明,以枯草芽抱杆菌ATCC6051△10为宿主,通过启动子P43介导的重组蛋白酶SplB表达活力最高(10.24 U/mL).通过亲和层析纯化了重组表达的SplB,并进行酶学性质研究,其最适温度为40℃,最适pH值为8.5,且具有良好的温度和pH值稳定性.在离子浓度较低情况下,Co2+对重组SplB活力有促进作用,Mg2+、K+不影响酶活力;而Cu2+、Zn2+、Ni+离子抑制SplB活力;十二烷基硫酸钠极大抑制重组SplB活力.将重组SplB应用于切割重组蛋白Prx的标签,结果表明,重组SplB具有WELQ肽段标签切割作用,并且SplB浓度越高,目标条带越浓.本研究为优化SplB的重组表达及在食品、医药领域的应用提供支持.
Recombinant Expression and Application of Chymotrypsin SplB in Bacillus subtilis

潘丽洁、王斌、潘力

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华南理工大学生物科学与工程学院,广东省发酵与酶工程重点实验室,广东广州 510006

胰凝乳蛋白酶SplB 枯草芽抱杆菌 WELQ肽段标签切割

"十四五"国家重点研发计划重点专项

2021YFC2100200

2023

10.7506/spkx1002-6630-20220122-224

食品科学
北京食品科学研究院

食品科学

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：1.327
ISSN：1002-6630
年,卷(期)：2023.44(2)
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