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克罗诺杆菌DNA质粒标准样品的制备及在婴幼儿配方奶粉检测中的应用

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选取阪崎克罗诺杆菌中atpD、gyrB、infB、fusA和glnS管家基因作为靶序列,构建质粒标准样品快速检测克罗诺杆菌.通过测序和菌落聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)对构建的重组质粒进行验证,传15代后对重组质粒进行测序验证质粒稳定性.制备的atpD、gyrB、infB、fusA和glnS质粒标准样品,对其进行定性实验,并检测其检出限和稳定性,然后使用atpD、gyrB、infB、fusA和glnS质粒标准样品对婴幼儿奶粉中克罗诺杆菌进行检测.通过菌落PCR和测序结果显示atpD、gyrB、infB、fusA和glnS质粒标准样品制备成功.PCR体系对质粒标准样品检测具有特异性,atpD、gyrB、infB、fusA和glnS检出限分别为1.14×106、1.07×107、1.09×107、1.73 ×105、7.54 × 105拷贝/μL.质粒冻干粉可以在-20、4、25℃稳定保存90d.将质粒标准样品用于23份婴幼儿奶粉样品检测,检测出1份具有gyrB管家基因.参考GB 4789.40-2016《食品微生物学检验克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)检验》的方法进行传统微生物分离检测,未检测出克罗诺杆菌.相较于传统方法质粒标准样品的应用极大提高了样品的检测效率.
Preparation and Application of Plasmid DNA Reference Material in the Detection of Cronobacter in Infant Formula

Cronobacterhouse-keeping genesplasmid standardsrapid detection

马跃然、王晖、范慧霞、赵红阳、卢行安、郜晓峰、康文艺

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河南大学国家食用菌加工技术研发专业中心,河南开封 475004

河南大学药学院,河南开封 475004

中国检验检疫科学研究院,北京 100123

克罗诺杆菌 管家基因 质粒标准样品 快速检测

"十三五"国家重点研发计划重点专项

2017YFC1601400

2023

10.7506/spkx1002-6630-20220506-075

食品科学
北京食品科学研究院

食品科学

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：1.327
ISSN：1002-6630
年,卷(期)：2023.44(12)
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