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温度响应的黄曲霉毒素B1纳米抗体重组表达、复性及生物活性

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将不同长度类弹性蛋白多肽(elastin-like polypeptide,ELP)与纳米抗体融合表达,获得具有温度响应能力的抗黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)纳米抗体.采用递归定向连接克隆得到重组表达载体pET30a-G8-ELP20、pET30a-G8-ELP40、pET30a-G8-ELP60、pET30a-G8-ELP80,分别转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,表达后经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)分析显示4种融合蛋白均以不溶性包涵体形式存在于菌体沉淀中,对其进行变性处理后,分别采用稀释复性、可逆相变循环(inverse transition cycling,ITC)纯化、透析复性、柱上复性4种方式对包涵体蛋白进行复性.SDS-PAGE分析4种复性方式分别获得的4种融合蛋白,结果显示其纯度差异不显著,但ITC纯化蛋白得率最高,分别为83％、90.7％、89.5％、88.3％;间接竞争酶联免疫吸附实验测定复性后融合蛋白活性,结果表明由稀释复性法获得的G8-ELP80重组蛋白IC50最低(4.35ng/mL);浊度分析法测得融合不同长度ELP标签纳米抗体的相变温度分别为45、38、32、28 ℃;圆二色谱分析显示4种融合蛋白二级结构均以β-折叠、β-转角为主,与预估结果相符.本研究将ELP标签与抗AFB1纳米抗体融合表达,实现了纳米抗体的温度刺激响应性,系统比较了不同复性方式对蛋白特性的影响,为后续AFB1检测分析提供了基础.
Recombinant Expression,Renaturation and Biological Activity of Temperature-Responsive Nanobodies against Aflatoxin B1

nanoantibodyelastin-like peptidefusion expressioninverse transition cyclinginclusion body renaturation

张乐平、涂追、李燕萍、李小江、帅文苑、张航、何庆华

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南昌大学食品科学与资源挖掘全国重点实验室,江西南昌 330047

南昌大学食品学院,江西南昌 330047

南昌大学中德联合研究院,江西南昌 330047

纳米抗体 类弹性蛋白 融合表达 可逆相变循环 包涵体复性

江西省自然科学基金面上项目江西省教育厅科学技术研究项目国家自然科学基金地区科学基金国家自然科学基金地区科学基金

20212BAB205035GJJ1600513226024831860260

2023

10.7506/spkx1002-6630-20221028-289

食品科学
北京食品科学研究院

食品科学

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：1.327
ISSN：1002-6630
年,卷(期)：2023.44(18)
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