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双重荧光RT-ERA技术快速检测贝类食品中诺如病毒

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目的:基于逆转录-酶促重组等温扩增(reverse transcription-enzymatic recombinase amplification,RT-ERA)技术,以MS2作为模式过程控制病毒,建立一种贝类食品中GⅠ与GⅡ型诺如病毒(norovirus,NoV)双重荧光RT-ERA快速检测方法.方法:分别将GⅠ、GⅡ NoV参考靶序列克隆到带有T7启动子的载体中,通过体外转录的方式获得高纯度NoVRNA参考样品.以设计的MS2噬菌体引物探针,与实验室前期筛选的GⅠ、GⅡNoV引物探针进行双重荧光RT-ERA实验,并对反应体系和反应程序进行优化,分析方法的灵敏度.最后,采用建立的方法开展真实样本检测,以GB 4789.42-2016《食品微生物学检验诺如病毒检验》为参比方法进行检测结果对比,确定方法的准确性和可行性.结果:建立MS2与GⅠ、MS2与GⅡ两组双重荧光RT-ERA检测方法,最佳引物及探针体积分别为4.1μL与1.8µL,检测时间可缩短至10 min左右,且最低可检出102拷贝/μL的NoV核酸样品.应用所建立的方法对29份真实样品进行检测,检测结果与GB 4789.42-2016一致.结论:本研究建立的双重荧光RT-ERA检测方法可实现对MS2、GⅠ和GⅡNoV的同时检测,且灵敏度高、准确性强,为今后NoV现场快速检测提供一定基础.
Rapid Detection of Norovirus in Shellfish by Dual Fluorescence Reverse Transcription-Enzymatic Recombinase Amplification

norovirusreverse transcription-enzymatic recombinase amplificationdual fluorescencerapid detectionshellfish

吴占文、王帅、康婕、李涛、李红娜、蔡杰、张昊、杨艳歌、袁飞

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中国检验检疫科学研究院,国家市场监管重点实验室(食品质量与安全),北京 100176

黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院,黑龙江大庆 163000

陕西省产品质量监督检验研究院,陕西西安 710048

诺如病毒 逆转录-酶促重组等温扩增技术 双重荧光 快速检测 贝类

中国检验检疫科学研究院基本科研业务费专项"十三五"国家重点研发计划重点专项

2022JK362018YFC1603606

2023

10.7506/spkx1002-6630-20221126-300

食品科学
北京食品科学研究院

食品科学

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：1.327
ISSN：1002-6630
年,卷(期)：2023.44(18)
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