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柠檬酸工业生产菌黑曲霉TNA09基因敲除体系的构建

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黑曲霉TNA09是高产柠檬酸的工业生产菌株,由于经过多次物理和化学诱变筛选,所以对其进行传统遗传改造非常困难.该试验成功构建黑曲霉TNA09原生质体转化方法,实现该工业菌株的基因工程操作.通过试验得出原生质体制备和再生的最佳条件:取CM斜面培养5 d的新鲜孢子约1×108个至100 mL马铃薯葡萄糖肉汤(potato dextrose broth,PDB)液体培养基,于37℃、180 r/min摇床培养17 h,取幼嫩菌丝0.70 g至1.50％裂解酶+0.50％蜗牛酶+0.20％溶菌酶的复合酶体系中,37℃处理3.25 h,该条件下原生质体再生率可达36％,并利用聚乙二醇(polyethylene-glycol,PEG)-CaCl2介导的原生质体转化方法一次成功将黑曲霉laeA、cexA基因敲除,为后续的柠檬酸工业菌株的分子改造奠定了坚实基础.
Construction of A Gene Knockout System in An Industrial Citric Acid Producing Strain of Aspergillus niger TNA09

张久祎、李洁、薛鲜丽、王德培、周昊

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天津科技大学生物工程学院,天津300457

工业发酵微生物教育部重点实验室,天津300457

天津市微生物代谢与发酵过程控制技术工程中心,天津300457

日照金禾生化集团股份有限公司,山东日照276800

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黑曲霉 柠檬酸 原生质体制备 原生质体再生 DNA转化

国家自然科学基金天津市自然科学基金重点项目

3190219320JCZDJC00140

2022

10.12161/j.issn.1005-6521.2022.03.025

食品研究与开发
天津市食品研究所,天津市食品工业生产力促进中心

食品研究与开发

CSTPCD北大核心
影响因子：0.561
ISSN：1005-6521
年,卷(期)：2022.43(3)
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