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粘质沙雷氏菌中果糖-1,6-/景天庚酮糖-1,7-二磷酸两个双功能酶的研究

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[目的]明确粘质沙雷氏菌中两个FBPases是否同时具有催化果糖-1,6-二磷酸(F-1,6-BP)与景天庚酮糖-1,7-二磷酸(S-1,7-BP)的功能.[方法]PCR构建pET28a-Sm-FBPase和pET28a-Sm-GlpX,IPTG诱导表达于大肠杆菌并应用镍柱纯化靶蛋白.应用体外酶学分析Sm-FBPase与Sm-GlpX酶学特性.[结果]SDS-PAGE结果表明Sm-FBPase、Sm-GlpX的分子量是45kDa、38 kDa.体外酶学分析表明两个酶均可催化F-1,6-BP和S-1,7-BP.Sm-GlpX是Mn2或Mg2+依赖型酶,而Sm-FBPase的激活需要Mn2.根据被测试的底物,Sm-FBPase最适pH 7.0～7.5、最适温度40℃;Sm-GlpX最适pH 8.0、最适温度40～45℃.当F-1,6-BP作底物时,Sm-FBPase与Sm-GlpX的Kcat/Km分别为6.88、7.55 S-1mmol-1 L.然而,当S-1,7-BP作底物时,Sm-FBPase与Sm-GlpX的Kcat/Km分别是3.17、8.54S-1mmol-1L.[结论]Sm-FBPase和Sm-GlpX均可催化F-1,6-BP与S-1,7-BP,Sm-GlpX催化S-1,7-BP的效率是Sm-FBPase的2.69倍.
Study on two bifunctional fructose-1,6-/sedoheptulose-1,7-bisphosphatases in Serratia marcescens

金文松、杨天行、何远志、高慧芳、刘文君、林辉、胡开辉、张燎原

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福建农林大学生命科学学院,福建福州350002

福建农林大学(古田)菌业研究院,福建古田352200

粘质沙雷氏菌 景天庚酮糖-1,7-二磷酸酶 果糖-1,6-二磷酸酶 异源表达 酶学特性

国家自然科学基金福建省高等学校新世纪优秀人才支持计划福建省教育厅中青年教师科研项目

81673542K8015056AKLA17041A

2018

生物技术
黑龙江省微生物学会 黑龙江省生物工程学会 黑龙江省科学院微生物研究所

生物技术

CSTPCD
影响因子：0.611
ISSN：1004-311X
年,卷(期)：2018.28(5)
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