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乳酸克鲁维酵母乳糖酶的可溶性表达及优化

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[目的]实现乳酸克鲁维酵母乳糖酶的可溶性表达,并初步研究其酶学性质.[方法]首先克隆了来源于乳酸克鲁维酵母的乳糖酶基因KLLAC,构建pET-KLLAC重组表达载体,并采用蛋白质复性及与pKJE7、pG-KJE8、pGro7、pG-Tf2和pTf-16伴侣蛋白共表达等方式拟提高其可溶性表达;并优化产酶条件,进一步提高其可溶性;采用ONPG法测定其酶学性质.[结果]在5种伴侣蛋白中pGro7与KHAC共表达时可溶性最高;产酶最优条件为:阿拉伯糖浓度0.5 mg/mL,IPTG浓度0.1 mmol/L,诱导温度20℃;在最优条件下,重组KLLAC与伴侣蛋白pGro7共表达时,表达量及酶活最高;经纯化后,乳糖酶KLLAC比酶活最高为102.36 U/mg.该酶的最适温度30℃,最适pH 7.0.[结论]KLLAC与伴侣蛋白的共表达以及诱导条件的优化,有效提高了该酶的可溶性表达水平、酶活性及稳定性.
Soluble expression and optimization of lactase from Kluyveromyces lactis

成静、朱智睿、杨江科

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武汉轻工大学生物与制药工程学院,湖北武汉430023

中诺生物科技发展江苏有限公司,江苏盐城224300

乳酸克鲁维酵母 乳糖酶 伴侣蛋白 可溶性表达 酶学性质

2020

生物技术
黑龙江省微生物学会 黑龙江省生物工程学会 黑龙江省科学院微生物研究所

生物技术

CSTPCD
影响因子：0.611
ISSN：1004-311X
年,卷(期)：2020.30(1)
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