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shRNA靶向干扰UL27、UL54基因对HSV-2复制的影响

Effects of shRNA targeting interference of UL27 and UL54 genes on HSV-2 replication

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为探讨单纯疱疹病毒-2型(Herpes simplex virus type 2,HSV-2)UL27、UL54基因的重组表达载体shRNA(small hairpin RNA,shRNA)联合干扰对HSV-2复制的影响,将重组质粒表达载体转染HEK293细胞,利用流式细胞术检测重组质粒转染HEK293的效率,实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)和蛋白免疫印迹(Western Blot)方法检测UL27、UL54基因及其蛋白的表达情况.此外,采用TICD50(50％tissue culture infective dose,TCID50)法和噻唑蓝(methyl thiazolyl terazolium,MTT)比色法检测病毒的滴度变化和HEK293细胞的存活率.结果检测显示:UL27 shRNA75+UL54shRNA1081联合干扰组的UL27、UL54基因mRNA的表达抑制率分别为(88.10±1.95)％和(85.53±2.28)％,gB蛋白、ICP27蛋白表达及子代病毒滴度均明显降低,HEK293细胞的存活率为(97.30±2.91)％,与单干扰组比较差异均有统计学意义(P<0.05).说明UL27shRNA75和UL54 shRNA1081这两个靶点联合干扰能显著抑制HSV-2在HEK293细胞中复制,为今后的HSV-2多基因的治疗提供研究基础.

潘晓瑜、吕延成、宋其芳、韩晋辉、朱俊访

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人疱疹病毒2型 小分子干扰RNA UL27基因 UL54基因

2018年广东高校省级重点平台和重大科研项目广东食品药品职业学院自然科学研究项目广东省医学科学技术研究基金

2018GKQNCX0822017ZR18A2019291

2021

10.3969/j.issn.2095-1736.2021.01.029

生物学杂志
合肥市科学技术协会

生物学杂志

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.554
ISSN：2095-1736
年,卷(期)：2021.38(1)
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