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基于前导肽和成熟区共进化提高米黑霉脂肪酶热稳定性研究

Enhancing the thermostability of Rhizomucor miehei lipase through coevolution of the propeptide and the mature region

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研究结合理性设计和定向进化技术,通过2轮易错PCR、2次定点突变和4轮定点饱和突变提高米黑霉脂肪酶(Rhizomucor miehei Lipase,RML)的热稳定性,共得到9株理想的脂肪酶突变体,在经70℃热处理2 h后,均能保留对甘油三酯的水解活性.以M9(D48V/V67A/S168P/S240A/S311C/D313H)的热稳定性最佳,热处理后保留活性可达(1316±31)U/mg,这一数据是野生型RML常温水解活性的5.2倍(野生型RML经热处理后完全失活).经测序分析,突变位点D48V和V67A位于目的基因前导肽上,S168P、S240A、S311C和D313H位于目的基因成熟区,且对前导肽上的两个突变点进行饱和突变后,突变体的热稳定性会发生改变,说明前导肽的突变会影响RML全基因的热稳定性,因此,RML热稳定性得以提高是源于其前导肽和成熟区的共进化作用.

王珏、胡丽丽、张育敏、吴娜、李睿

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山西中医药大学 基础医学院,晋中030600

前导肽 基因突变 米黑霉脂肪酶 热稳定性

山西中医药大学科技创新能力培育计划山西省自然科学基金青年项目

2018PY-20201801D221278

2021

10.3969/j.issn.2095-1736.2021.01.041

生物学杂志
合肥市科学技术协会

生物学杂志

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.554
ISSN：2095-1736
年,卷(期)：2021.38(1)
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