以香菇菌株YJ-01为试材,以原生质体产量与再生率为指标,探究酶种类、酶解时间、酶解温度、pH、稳渗剂种类、稳渗剂浓度及菌丝菌龄等7个因素对原生质体产量与再生率的影响.通过单因素试验,选出了4个因素(酶解温度、酶解时间、菌龄和稳渗剂浓度)利用四因素二次通用旋转设计进行优化.结果表明:(1)YJ-01原生质体最佳制备条件:pH 5.0,0.5 mol/L MgSO4溶液作稳渗剂,对5日龄菌丝体于28℃条件下酶解3 h.各因素对原生质体产量的影响作用依次为酶解温度>酶解时间>菌龄>稳渗剂浓度.(2)YJ-01原生质体最佳再生条件为,当pH 5.5,以0.5 mol/L蔗糖溶液作稳渗剂,对6.5日龄菌丝体在27.8℃酶解2.9 h.各因素对原生质体再生率的影响作用依次:稳渗剂浓度>酶解时间>菌龄>酶解温度.
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