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靶向HER2的通用型CAR-T细胞来源的细胞外囊泡的制备及功能鉴定

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目的 利用可持续传代的T淋巴细胞系,制备携带靶向人表皮生长因子受体2(HER2)蛋白的嵌合抗原受体(CAR)的细胞外囊泡(EV),并检测其对HER2+肿瘤细胞的杀伤能力.方法 采用分子克隆技术构建重组慢病毒质粒.利用成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)/CRISPR相关蛋白9(Cas9)技术和慢病毒感染的方法构建底盘Jurkat细胞.流式细胞术检测底盘Jurkat细胞、嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞和CAR-Jurkat细胞的构建.通过聚乙二醇6000(PEG600)浓缩方法和细胞挤压方法制备EV;微粒子追踪分析(NTA)和Western blot法鉴定EV.萤光素酶报告基因系统检测细胞和EV对肿瘤细胞的杀伤作用.荧光显微镜观察免疫细胞对EV的吞噬作用.结果 酶切鉴定和基因测序结果表明重组质粒构建成功.流式细胞术结果显示底盘Jurkat细胞、CAR-T细胞和CAR-Jurkat细胞顺利制备.NTA结果显示制备的EV大小正确.萤光素酶报告基因系统证明CAR-T细胞、CAR-Jurkat细胞、CAR-T EV和CAR-Jurkat EV对HER2+肿瘤细胞均具有靶向杀伤能力.荧光显微镜观察表明,提高CD47分子的表达水平能够减弱免疫细胞对通用型CAR-Jurkat EV的吞噬作用.结论 通用型CAR-T细胞来源EV能够靶向杀伤HER2+肿瘤细胞.

蒙若彤、王鹏举、赵晓娟、郑瑞、梁思辛、张依婷、董昊、韩玉洁、杨安钢、白占涛、阎博、路凡

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延安大学生命科学学院,陕西延安 716000

空军军医大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室,陕西西安 710032

空军军医大学基础医学院免疫学教研室,陕西西安 710032

新乡医学院医学检验学院,河南新乡 453003

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嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞 同种异体 底盘细胞 细胞外囊泡

国家自然科学基金国家肿瘤生物学重点实验室自主课题

81972870CBSKL2022ZZ20

2024

10.13423/j.cnki.cjcmi.009707

细胞与分子免疫学杂志
中国免疫学会,第四军医大学

细胞与分子免疫学杂志

CSTPCD北大核心
影响因子：0.817
ISSN：1007-8738
年,卷(期)：2024.40(2)
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