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细胞间质上皮转化因子(c-Met)中和抗体的筛选及鉴定

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目的 通过抗体的随机突变库和细胞展示技术，对具有中和活性的细胞间质上皮转化因子(c-Met)抗体进行结构和活性优化，获得亲和力高、激动活性低的抗体，并使其保持亲本抗体的中和及内化活性，提高抗体偶联药物(ADC)的成药性。方法 构建和筛选c-Met中和激动型抗体3E1D7的重链互补决定区3(CDR3)随机突变库，获得CDR3区有4个氨基酸突变的候选抗体2G5。通过ELISA检测2G5的中和活性，流式细胞术检测其在A549细胞的内化，CCK-8法检测2G5对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的影响，通过TranswellTM小室检测2G5对A549细胞迁移的影响，通过Western blot法检测2G5对c-Met磷酸化的影响。结果 突变抗体2G5与抗原c-Met保持较高的结合能力，半数有效浓度(EC50)为41。53 ng/mL，并具有较高的中和活性。在A549细胞中，2G5引起显著的内化效应，但不激活c-Met信号通路和细胞迁移。2G5不能引起HUVEC增殖。结论 通过建立抗体随机突变库可优化c-Met抗体的活性，获得成药性更高的突变型抗体。

蒋明、于丽华、付敏、毛玉婷、尹衍新

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同济大学苏州研究院生物医药研究中心,江苏苏州 215000

细胞间质上皮转化因子(c-Met) 中和抗体 流式细胞术

国家科技重大专项-重大新药创制国家科技重大专项-重大新药创制国家自然科学基金山东省重点研发计划

2019ZX09732002-0122019ZX09732002-007-002820714732020CXGC011301

2024

细胞与分子免疫学杂志
中国免疫学会,第四军医大学

细胞与分子免疫学杂志

CSTPCD北大核心
影响因子：0.817
ISSN：1007-8738
年,卷(期)：2024.40(9)