畜牧兽医学报2020，Vol.51Issue(1) ：120-127.

信号肽对猪瘟病毒E2蛋白在杆状病毒表达系统中分泌表达的影响

Effect of Signal Peptide on the Secretory Expression of CSFV E2 Protein in Baculovirus Expression System

魏蔷 刘运超 白怡霖 冯华 宋亚鹏 张改平
畜牧兽医学报2020，Vol.51Issue(1) ：120-127.
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信号肽对猪瘟病毒E2蛋白在杆状病毒表达系统中分泌表达的影响

Effect of Signal Peptide on the Secretory Expression of CSFV E2 Protein in Baculovirus Expression System

魏蔷 1刘运超 1白怡霖 2冯华 1宋亚鹏 3张改平4
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作者信息

  • 1. 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点实验室,郑州450002
  • 2. 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点实验室,郑州450002;西北农林科技大学动物医学院,杨凌712100
  • 3. 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点实验室,郑州450002;河南农业大学牧医工程学院,郑州450002
  • 4. 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点实验室,郑州450002;河南农业大学牧医工程学院,郑州450002;江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,扬州225009
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摘要

旨在通过引入信号肽序列实现猪瘟病毒E2蛋白在杆状病毒表达系统中的高效表达.首先将内源信号肽(简称endo)、蜂素信号肽(简称mel)及gp67信号肽(简称gp67)分别引入pFastBac1载体,随后插入E2基因,构建重组质粒.随后将重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选得到重组黏粒,将重组黏粒转染sf21细胞以得到杆状病毒.经扩增后大量感染细胞,检测E2蛋白表达情况,利用镍填料纯化得到E2蛋白,并进行蛋白糖基化水平鉴定及蛋白免疫原性分析.PCR鉴定结果显示成功构建了重组质粒.挑选白斑进行PCR鉴定,证实得到重组黏粒.Western blot检测结果表明,E2蛋白实现了分泌表达,进一步比较细胞培养上清中E2蛋白的表达水平,确定gp67信号肽介导的E2蛋白分泌表达量最高.经镍填料纯化得到E2蛋白,SDS-PAGE结果显示其纯度较高,产率为25mg·L-1.通过ELISA分析其抗原性,结果表明纯化所得E2蛋白能特异性识别猪瘟阳性血清中的抗体,其抗原性良好.将纯化后的E2蛋白添加ISA201佐剂乳化后免疫BALB/c小鼠,阻断ELISA结果显示,免疫后14 d即产生较高水平的猪瘟特异性抗体,表明E2蛋白免疫原性良好.本研究为E2亚单位疫苗的研制奠定了基础.

关键词

信号肽/E2蛋白/猪瘟病毒(CSFV)/分泌表达

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出版年

2020
畜牧兽医学报
中国畜牧兽医学会

畜牧兽医学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.729
ISSN：0366-6964
被引量4
参考文献量7
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