摘要
miRNAs是对哺乳动物乳腺组织发育及泌乳机能进行调控的重要因子.本研究依据已有的关中奶山羊乳腺组织miRNA表达谱,选择不同泌乳时期差异表达的miR-92a为研究对象,探究miR-92a对山羊乳腺上皮细胞(GMEC)增殖及凋亡的调控作用,并挖掘其潜在的调控基因.采用荧光定量PCR、MTT检测、EdU检测及流式细胞术,检测miR-92a在不同泌乳时期乳腺组织的表达情况,并在细胞水平检测miR-92a对乳腺上皮细胞增殖、凋亡及细胞周期的调控作用.利用RNA-seq技术,分析过表达miR-92a乳腺上皮细胞中的差异表达基因.qRT-PCR结果显示,miR-92a在奶山羊泌乳初期乳腺组织中表达量极显著高于泌乳中期(P＜0.01),表明miR-92a可能对奶山羊泌乳性状有重要的调控作用.GMEC过表达miR-92a后,试验结果显示:与NC对照组比较,miR-92a过表达组的EdU阳性细胞数极显著减少(P＜0.01),S期的细胞数显著下降、G1期的细胞数显著增加,同时miR-92a组的凋亡细胞数目显著增加(P＜0.05).采用RNA-seq,构建了miR-92a过表达mRNA文库,发现下调基因54个,上调基因160个.GOterms及KEGG通路分析显示差异表达基因调控乳腺上皮细胞多种生物学功能.以上结果表明miR-92a促进GMEC凋亡、抑制其增殖,测序结果进一步证明miR-92a对奶山羊乳腺发育及泌乳性能具有潜在的调控作用.
基金项目
陕西省重点研发计划(2018ZDCXL-NY-01-03)
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