畜牧兽医学报2020，Vol.51Issue(2) ：404-408.

猪星状病毒4型SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测方法的建立

Establishment and Application of a SYBR Green Ⅰ Real-time PCR Technique for the Detection of Porcine Astrovirus 4

陈少杰 刘立辉 吴志勇 肖娜 袁广富 王晶 邢亚茹 刘如月 范京惠 左玉柱
畜牧兽医学报2020，Vol.51Issue(2) ：404-408.
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猪星状病毒4型SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测方法的建立

Establishment and Application of a SYBR Green Ⅰ Real-time PCR Technique for the Detection of Porcine Astrovirus 4

陈少杰 1刘立辉 2吴志勇 3肖娜 2袁广富 1王晶 1邢亚茹 1刘如月 1范京惠 1左玉柱1
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作者信息

  • 1. 河北农业大学动物医学院,保定071001
  • 2. 定州市农业农村局,定州073000
  • 3. 邯郸市畜牧技术推广站,邯郸056000
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摘要

为建立一种快速检测猪星状病毒4型(PAstV4)的SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法,根据已知的猪星状病毒4型序列的ORF1a基因设计了特异性引物,并将扩增片段克隆到pMD19-T载体上;将构建的重组质粒作为标准品建立SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法,并对建立方法的灵敏性、特异性及重复性进行验证.结果 显示,建立的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法最低检测量为50.3拷贝·μL-1,其灵敏度是普通PCR的100倍;与CSFV、PRRSV、PRV、PEDV、PDCoV无交叉反应,特异性较好;建立的标准曲线呈良好的线性关系,相关系数R2 =1.00.应用该方法检测了2018-2019年收集的43份临床样品,阳性率为18.6％.本研究为猪星状病毒4型的临床检测建立了一种快速、灵敏、特异性强的方法.

关键词

猪星状病毒/荧光定量/SYBR/Green/Ⅰ

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基金项目

河北省重点研发计划项目(19226622D)

河北省农业产业技术体系生猪创新团队(HBCT2018110207)

出版年

2020
畜牧兽医学报
中国畜牧兽医学会

畜牧兽医学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.729
ISSN：0366-6964
被引量4
参考文献量1
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