摘要
旨在筛选可卡因-苯丙胺调节转录肽(cocaine and amphetamine regulated transcript peptide,CART)的受体,明确其受体在优势卵泡(dominant follicles,DF)和从属卵泡(subordinate follicles,SF)的表达特性.本研究使用琼脂糖Protein A/G磁珠免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)鉴定CART及其相互作用蛋白;利用HM-MTOP V2.0分析其跨膜次数并获得G蛋白偶联受体(G-protein-coupled receptors,GPCRs);运用SWISS-MODEL 和PDB数据库对CART和筛选出的GPCRs同源建模,获得模型分子的PDBQT文件,并通过评分函数对构建模型质量和每个氨基酸残基的模型质量进行评价;将CART和待分析受体PDBQT文件输入ZDOCK进行分子对接,获得复合体立体空间模型和评分函数值;利用qRT-PCR和免疫组织化学技术对筛选出的靶蛋白趋化因子样受体1(chemokine-like receptor 1,CM KLR1)在牛DF和SF中的表达及定位进行分析.Co-IP获得的111个蛋白质组分中包含10个膜蛋白,分别为A2M、C5、CMKLR1、COX2、DDOST、HEATR5A、B3AT、ADT2、RPN2、SLC4A1;其中CMKLR1具有7次跨膜的α螺旋结构,属于GPCRs;利用SWISS-MODEL建模技术构建CART和CM KLR1的分子模型,ZDOCK分子对接后获得复合体立体空间模型,其中评分函数值最高为1 977.34.qRT-PCR分析表明,CMKLR1 mRNA在SF中的表达量显著高于DF(P＜0.05);免疫组织化学分析结果表明,CMKLR1存在于牛DF和SF颗粒层、膜层,在SF颗粒层和膜层细胞显色强度均高于DF,这与qRT-PCR的分析结果相一致.结果 显示,蛋白同源建模和分子对接技术应用于受体筛选是可行的.CMKLR1作为神经肽CART的候选受体,在SF的表达量显著高于DF,该研究对CART受体的鉴定及深入阐明CART调控牛卵泡发育的作用机理具有重要意义.
基金项目
国家自然科学基金(31873002)
山西省国际科技合作项目(201603D421006)
山西省三晋学者和人才引进项目:()
山西省重点研发计划项目(201803D31062)
国家科技期刊平台
NSTL
维普
万方数据