摘要
为了初步探讨绵羊痒螨巨噬细胞迁移抑制因子(PoNIF)对健康新西兰兔外周血单个核细胞(PBMC)中Th1/Th2和Th17/Treg细胞平衡的变化.采用RT-PCR从绵羊痒螨总RNA中扩增得到MIF全长基因,经原核表达、纯化重组PoMIF(rPoMIF)蛋白,并分析其氧化还原酶和互变异构酶活性.筛选与健康新西兰兔PBMC孵育的最佳rPoMIF浓度,且用最佳浓度rPoMIF(0.2 μg·mL-1)与PBMC共同孵育0、1、6、12、24、36 h后收集细胞,用荧光定量PCR检测其Th1/Th2/Th17/Treg细胞相对应的特征性转录因子T-bet/GA TA-3/RORc/Foxp3和特征性细胞因子IFⅣ-γ/IL-4/IL-17A/IL-10 mRNA表达变化.结果 表明:PoMIF全长363 bp,rPoMIF大小为32 ku(含pET32a标签蛋白19 ku),且具有互变异构酶活性;rPoMIF刺激后PBMC中Th1细胞的T-bet和IFN-γ先下降后上升,Th2细胞的GA TA-3和IL-4均呈下降趋势,且T-bet /GA TA-3和IFⅣ-γ/IL-4比值在12、24和36 h均升高;Th17细胞的RORc和IL-17A在各时间点下降,而Treg细胞的Foxp3和IL-10在各时间点升高,且RORc/Fox p3和IL-17A/IL-10比值在各时间点均变低.rPoMIF可造成家兔外周血单个核细胞的Th1/Th2和Th17/Treg平衡分别向Th1和Treg偏移.
基金项目
四川农业大学学科“双支计划”(SC-03573070)
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