摘要
旨在分析预测的10种鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci,Cps)Ⅲ型分泌系统效应蛋白在细胞内的定位,为下一步研究其结构与功能奠定基础.本研究利用计算机辅助的生物信息学方法(Effective T3和BPBAac tool)预测Cps T3 SS效应蛋白.利用分子克隆技术构建重组质粒pGEX-6P-1/目的基因,诱导表达、纯化相应重组蛋白.皮下免疫BALB/c小鼠,制备各重组蛋白的多克隆抗体,ELISA测定其效价.以制备的多克隆抗体为一抗,应用间接免疫荧光法检测假定的效应蛋白在感染细胞中的定位.本研究通过应用Effective T3、BPBAac tool交叉验证,预测了14个Cps T3 SS效应蛋白编码基因:CPSIT_0357、CPSIT 0429、CPSIT 0461、CPSIT 0463、CPSIT_0490、CPSIT 0594、CPSIT 0785、CPSIT 0844、CPSIT 0846、CPSIT 0019、CPSIT 0020、CPSIT_0968、CPSIT0969、CPSIT_0942,并进行分析.构建了14个靶基因的重组质粒,经IPTG诱导,除CPSIT_0357、CPSIT 0429、CPSIT_0968、CPSIT 0969外,其他10个重组菌分别表达了相对分子质量(Mr)与预测Mr相近的可溶性蛋白.经GST树脂纯化后,将重组蛋白免疫雌性BALB/c小鼠,血清抗体效价为(1∶32 000)～(1∶64 000).IFA细胞内定位观察,发现CPSIT_0844和CPSIT 0846位于包涵体膜,而CPSIT_0461、CPSIT_0463、CPSIT_0490、CPSIT0594、CPSIT_0785、CPSIT 0019、CPSIT_0020、CPSIT_0942位于包涵体内.本研究鉴定了2种定位于衣原体包涵体膜的效应蛋白和8种定位于衣原体包涵体中的效应蛋白.
基金项目
国家自然科学基金(31600150)
湖南省大学生研究性学习与创新性实验计划项目(张旭)()
湖南省教育厅一般项目(18C0457)
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