畜牧兽医学报2020，Vol.51Issue(6) ：1419-1428.

猪支原体肺炎LAMP-LFD快速检测方法的建立及初步应用

Rapid and Sensitive Diagnosis of Mycoplasma hyopneumoniae by Loop-mediated Isothermal Amplification Combined with a Lateral Flow Dipstick

孙盼盼 时建立 彭喆 王硕 王妍 吴晓燕 徐绍建 李俊
畜牧兽医学报2020，Vol.51Issue(6) ：1419-1428.
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猪支原体肺炎LAMP-LFD快速检测方法的建立及初步应用

Rapid and Sensitive Diagnosis of Mycoplasma hyopneumoniae by Loop-mediated Isothermal Amplification Combined with a Lateral Flow Dipstick

孙盼盼 1时建立 2彭喆 2王硕 3王妍 4吴晓燕 5徐绍建 2李俊6
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作者信息

  • 1. 青岛农业大学,青岛266000;山东省农业科学院畜牧兽医研究所,济南250100
  • 2. 山东省农业科学院畜牧兽医研究所,济南250100
  • 3. 山东师范大学,济南250014
  • 4. 青岛农业大学,青岛266000
  • 5. 山东省农业科学院畜牧兽医研究所,济南250100;山东师范大学,济南250014
  • 6. 青岛农业大学,青岛266000;山东省农业科学院畜牧兽医研究所,济南250100;山东师范大学,济南250014
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摘要

旨在采用环介导等温扩增(LAMP)和横向流动试纸条(LFD)相结合的方法,建立一种快速、特异,过程可视化的猪肺炎支原体(M yco plasmah yo pneumoniae,Mhp)检测方法.针对猪肺炎支原体(Mhp) P36基因设计5套特异性引物和1条异硫氰酸荧光素(FITC)标记的探针,进行LAMP扩增反应.将生物素标记的LAMP产物与FITC标记的探针进行特异性杂交,并使用横向流动试纸条完成扩增产物的检测.经优化,LAMP最佳反应条件为65℃,反应15 min,从基因组DNA提取到LFD结果判断只需40 min左右,比常规PCR技术缩短近2h.LAMP-LFD可特异性地检出猪肺炎支原体(Mhp),对猪鼻支原体(Mhr)及猪圆环病毒(PCV)等常见猪病病原的检测结果为阴性.灵敏性试验表明,LAMP-LFD对Mhp的检测灵敏度为1×100个拷贝DNA,是普通PCR的1 000倍.利用本方法可从采集的88份临床疑似病料样品中检测到64份阳性,国标PCR方法可检测到56份阳性,符合率可达90.90％.综上,本研究建立的LAMP-LFD方法可特异、准确地应用于Mhp的检测,而且灵敏度高、操作简单、仪器设备依赖性低、检测成本低、耗时短,适合基层实验室、应急检测或现场监测等使用,具有较高的推广价值,有望发展成为Mhp快速检测的有效手段.

关键词

猪肺炎支原体/环介导等温扩增技术/横向流动试纸条/诊断

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基金项目

山东省生猪产业技术体系疫病控制岗位(SDAIT-08-07)

山东省重大科技创新工程项目(2019JZZY010720)

“十三五”重点研发计划(2016YFD0500708)

山东省农业重大应用技术创新项目(SD2019XM003)

山东省农业重大应用技术创新项目(SD2019XM006)

出版年

2020
畜牧兽医学报
中国畜牧兽医学会

畜牧兽医学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.729
ISSN：0366-6964
被引量6
参考文献量1
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