畜牧兽医学报2020，Vol.51Issue(10) ：2463-2471.DOI:10.11843/j.issn.0366-6964.2020.10.014

1群4型禽腺病毒的分离鉴定及Fiber-2蛋白的免疫效果分析

Isolation and Identification of Group Ⅰ Type 4 Avian Adenovirus and Analysis in Immune Effect of Fiber-2 Protein

程增青 范根成 窦小龙 刘红祥 申茂欣 徐全刚 杨汉春
畜牧兽医学报2020，Vol.51Issue(10) ：2463-2471.DOI:10.11843/j.issn.0366-6964.2020.10.014
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1群4型禽腺病毒的分离鉴定及Fiber-2蛋白的免疫效果分析

Isolation and Identification of Group Ⅰ Type 4 Avian Adenovirus and Analysis in Immune Effect of Fiber-2 Protein

程增青 1范根成 2窦小龙 2刘红祥 2申茂欣 2徐全刚 3杨汉春4
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作者信息

  • 1. 中国农业大学动物医学院,北京100193;青岛易邦生物工程有限公司/动物基因工程疫苗国家重点实验室,青岛266114
  • 2. 青岛易邦生物工程有限公司/动物基因工程疫苗国家重点实验室,青岛266114
  • 3. 中国动物卫生与流行病学中心,青岛266032
  • 4. 中国农业大学动物医学院,北京100193
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摘要

旨在鉴定河南某蛋鸡场以心包积液、肝肿大出血为特征的病原,并对病原的免疫原性蛋白进行表达和效果分析.本研究采用病毒分离、血清学试验、PCR检测及测序分析、动物回归试验、大肠杆菌表达、蛋白纯化、攻毒保护等方法进行研究.结果 显示,所采集样品经卵黄囊途径接种7日龄SPF鸡胚,盲传2代后获得病毒;PCR可扩增出约900 bp的Hexon基因片段,经测序,其Hexon基因与血清C4型毒株的相似性为100％;血清中和试验结果表明分离的禽腺病毒为1群血清4型禽腺病毒,命名为HN-ZK株.该毒株可在鸡胚原代肝细胞上产生CPE,病毒含量可达107.5TCID50·0.1 mL-1.动物回归试验表明,该分离毒株可使35日龄SPF鸡100％ (10/10)表现出发病症状.以分离株的DNA为模板,利用大肠杆菌原核表达系统,获得相对分子质量约为33 ku的Fiber-2蛋白,离心浓缩、纯化后蛋白含量为300 mg·mL-1.将表达的Fiber-2蛋白用不同的剂量免疫SPF鸡,结果表明20μg·只-1的剂量能使鸡完全抵抗强毒株的攻击,说明Fiber-2蛋白具有较好的免疫原性.本研究可为禽心包积水-肝炎综合征的诊断和基因工程亚单位疫苗的研制提供数据参考.

关键词

Ⅰ群禽腺病毒/鉴定/Fiber-2蛋白/亚单位疫苗

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基金项目

科技金融专项-智库基金(18-6-3-1-jch)

出版年

2020
畜牧兽医学报
中国畜牧兽医学会

畜牧兽医学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.729
ISSN：0366-6964
被引量4
参考文献量2
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