畜牧兽医学报2020，Vol.51Issue(10) ：2472-2480.DOI:10.11843/j.issn.0366-6964.2020.10.015

非洲猪瘟病毒强免疫原性重组CD2v抗原的制备与初步应用

Preparation and Preliminary Application of Highly Immunogenic Recombinant CD2v Antigen of African Swine Fever Virus

周晓慧 肖景景 张鑫宇 张泉 夏晓莉 孙怀昌
畜牧兽医学报2020，Vol.51Issue(10) ：2472-2480.DOI:10.11843/j.issn.0366-6964.2020.10.015
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非洲猪瘟病毒强免疫原性重组CD2v抗原的制备与初步应用

Preparation and Preliminary Application of Highly Immunogenic Recombinant CD2v Antigen of African Swine Fever Virus

周晓慧 1肖景景 1张鑫宇 1张泉 1夏晓莉 1孙怀昌2
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作者信息

  • 1. 扬州大学兽医学院,江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,扬州225009
  • 2. 扬州大学兽医学院,江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,扬州225009;江苏农牧职业技术学院,泰州225300
  • 折叠

摘要

旨在获得非洲猪瘟病毒(ASFV)强免疫原性重组CD2v抗原,利用生物信息学软件进行CD2v抗原指数分析,将其细胞质内免疫显性区与类弹性蛋白多肽(ELP)在重组大肠杆菌中进行融合表达,对ELP-CD2v融合蛋白的相变循环(ITC)条件进行优化,在优化条件下进行融合蛋白纯化,利用烟草蚀纹病毒(TEV)蛋白酶活性包涵体切除ELP标签,通过免疫转印法对重组CD2v抗原进行鉴定,利用重组CD2v抗原建立ELISA抗体检测方法,与多抗原ELISA对ASFV抗体阳性和阴性血清进行平行检测.结果 显示,ELP-CD2v融合蛋白获得正确、可溶性表达,ITC条件为28℃和1.5 mol·L-1 NaCl,在0.2％ Triton X-100存在下进行ITC,纯化的融合蛋白纯度为76.3％;TEV蛋白酶活性包涵体能有效切割ELP标签,再次ITC回收的重组CD2v抗原纯度为91.7％,能被ASFV抗体识别;根据多抗原ELISA检测结果选择血清样品,用重组CD2v抗原ELISA进行检测,结果显示,15份ASFV抗体阴性血清均为CD2v抗体检测阴性,15份ASFV抗体阳性血清均为CD2v抗体检测阳性.这些研究结果表明,ASFV的CD2v蛋白胞内区存在强免疫原性表位,其重组抗原有望用于CD2v的抗体检测.

关键词

非洲猪瘟病毒/CD2v蛋白/强免疫原性抗原/初步应用

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基金项目

国家重点研发计划项目(2017YFD0502303)

国家重点研发计划项目(2018YFC0840404-3)

江苏高校优势学科建设工程资助项目(PAPD)()

出版年

2020
畜牧兽医学报
中国畜牧兽医学会

畜牧兽医学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.729
ISSN：0366-6964
被引量11
参考文献量2
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