摘要
本研究旨在检测重组结核分枝杆菌10 ku培养滤液蛋白(culture filtrate protein 10,CFP10)对肺泡Ⅱ型上皮细胞系A549细胞Toll样受体(TLRs)信号途径及其介导的炎症反应的影响.PCR扩增cfp10目的基因片段,构建重组质粒载体pCzn1-CFP10.将重组质粒pCzn1-CFP10转入BL21 (DE3)大肠杆菌感受态细胞,IPTG诱导表达重组蛋白CFP10 (rCFP10)并鉴定,纯化rCFP10,去除内毒素及脱盐备用.设置对照组,利用MTT检测rCFP10对A549细胞的存活率的影响;通过qRT-PCR、Western blot及ELISA等技术,分别在转录和翻译水平检测rC FP10对A549细胞TLRs信号途径关键分子及其下游炎症因子表达的影响.结果 显示,成功构建重组表达载体pCzn1-CFP10并表达纯化出高纯度的rCFP10.MTT结果显示,随着rCFP10浓度增加和处理时间延长,A549细胞存活率显著降低.与空白对照组相比,rCFP10分别从转录和翻译水平显著(P＜0.05)或极显著(P＜0.01)上调A549细胞中TLRs途径关键分子TLR2、TLR4、MyD88、TRAF6和NF-κB p65及下游炎症因子IL-6、TNF-α的表达水平.rCFP10蛋白可以通过激活A549细胞TLRs受体信号途径促进细胞炎症因子的分泌,这将为进一步加深理解结核病发病机制提供理论依据.
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