摘要
本研究旨在建立一种能够同时鉴别包括大肠杆菌O157∶H7、沙门菌、空肠弯曲菌、单核细胞增生李斯特菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌和金黄色葡萄球菌7种常见食源性致病菌的GeXP多重PCR检测方法.根据这些致病菌在GenBank上公布的保守基因序列,设计合成了7对特异性GeXP引物.用单一或混合细菌样品的DNA模板优化反应条件,设置对照组,构建重组质粒,随机组合不同浓度的样品,验证所建立的GeXP方法的特异性、敏感性和准确性.最后用该方法检测120份临床样品,进一步验证所建立的GeXP检测方法的准确性和可靠性.结果 显示,单一或混合模板的GeXP检测均能特异性出现相应清晰峰值,可在103拷贝·μL-1水平上同时特异地检测出7种细菌病原体,不同浓度模板混合时,本试验所建立的方法依然可检测出对应病原体.检测120份临床样品,GeXP多重PCR阳性率为2.50％(3/120)～15.83％ (19/120),普通PCR阳性率为2.50％ (3/120)～15.00％ (18/120),GeXP多重PCR多检出8份阳性,表明GeXP方法更为敏感与准确.本研究建立的同时鉴别7种食源性致病菌的GeXP多重PCR检测方法,具有高通量、特异性强和敏感性高的特点,为食源性常见致病菌感染或混合感染提供了快速分子诊断方法.
基金项目
广西自然科学青年基金(2017GXNSFBA198097)
广西科技重大专项(桂科AA17204057)
广西“八桂学者”专项(2019-79)
国家“万人计划”领军人才专项(W02060083)
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