摘要
旨在克隆、表达马泰勒虫(Theileria equi)和驽巴贝斯虫(Babesia caballi)半胱氨酸蛋白酶(cystein protease,CP)基因,并对其进行生物信息学预测和分析.提取马泰勒虫和驽巴贝斯虫的DNA,以此为模板扩增目的基因.利用克隆技术和原核表达系统克隆表达CP,用尿素透析法进行纯化.通过Dot blot验证其与相应阳性血清特异性反应.应用MAGA软件和Prot Param、TMHMM、SignalP-5.0、Antibody Epitope Prediction、SYFPEIT HII、ProPred及EzMol2.1等在线分析软件分析T.equi-CP和B.caballi-CP的基因及其蛋白序列.成功构建了重组质粒GST-T.equi-CP和GST-B.caballi-CP,经SDS-PAGE试验结果显示该基因表达的蛋白以包涵体形式高效表达,并能与相应阳性血清特异性反应.对T.equi-CP和B.caballi-CP基因编码蛋白进行系统发育分析发现,与其他原虫物种相比,系统发育分析结果与其原生动物学分类结果一致.经生物信息学分析预测显示,两个CP蛋白为亲水性蛋白,无跨膜区,不属于跨膜蛋白,无Th细胞表位,在细胞质、线粒体和细胞核中定位较多.其中T.equi-CP蛋白的相对分子质量为29 948.60,等电点为5.53,稳定系数为22.50.B.caballi-CP蛋白的相对分子质量为14 603.62,等电点为8.54,稳定系数为47.69,有信号肽区域.T.equi-CP和B.caballi-CP蛋白具有良好的反应原性,作为亲水性膜外蛋白,无Th细胞表位,在细胞质、线粒体和细胞核中定位较多等,可能说明CP在马梨形虫逃避宿主免疫反应,参与增殖、分化及程序性细胞死亡等发挥作用.本研究为T.equi-CP和B.caballi-CP蛋白的功能研究与马梨形虫的致病机制研究提供了理论依据.
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