摘要
旨在探究牛支原体(Mycoplasmabovis,Mb)NADH氧化酶NOX2的生物学功能,本研究参照GenBank中Mb湖北分离株(Mb Hubei-1 strain)nox2基因序列设计引物,应用PCR扩增获得Mb临洮分离株的nox2基因,在测序及序列优化的基础上,构建原核表达载体pET-nox2,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中诱导表达,进而对表达产物rM bNOX2的酶促活性、免疫原性,NOX2在M b内的分布,rM bNOX2抗血清的补体介导体外杀菌活性和对M b黏附宿主细胞的抑制活性进行了分析.结果表明,Mb临洮株nox2基因全长1350 bp,与GenBank中已知序列的Mb nox2基因序列比较,除Mb JF4278株相似性为97.93％ 外,其余均为99.93％.SDS-PAGE结果显示,优化的nox2基因在大肠杆菌中成功表达,重组蛋白rM bNOX2相对分子质量约为67 ku,且具有良好的酶促活性;ELISA与Western blot结果显示,rMbNOX2具有良好的免疫原性,且Mb NOX2在细胞浆中的分布多于细胞膜;补体介导的体外杀菌试验及黏附抑制试验证实,rM bNOX2抗血清具有明显的补体介导杀支原体活性,并可有效抑制M b对宿主细胞的黏附.本研究为深入探讨M b NOX2生物学功能奠定了基础.
基金项目
甘肃农业大学学科建设基金(GAU-XKJS-2018-062)
甘肃省教育厅产业支撑引导项目(2019C-03)
国家肉牛/牦牛产业技术体系项目(CARS-37)
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