畜牧兽医学报2020，Vol.51Issue(12) ：3133-3140.DOI:10.11843/j.issn.0366-6964.2020.12.022

基于NS4蛋白的蓝舌病病毒间接ELISA抗体检测方法的建立及初步应用

Establishment and Preliminary Application of Indirect ELISA Based on Recombinant NS4 Protein for Detection of Bluetongue Virus Antibodies

易华山 赵瑶 马鲜平 李欢 夏宇 朱文青 刘倩如 陈思倩 曹慧贞 姚婷 高丽旭 张金阳 杨发挥 魏晓蓉 李前勇 谢远兵
畜牧兽医学报2020，Vol.51Issue(12) ：3133-3140.DOI:10.11843/j.issn.0366-6964.2020.12.022
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基于NS4蛋白的蓝舌病病毒间接ELISA抗体检测方法的建立及初步应用

Establishment and Preliminary Application of Indirect ELISA Based on Recombinant NS4 Protein for Detection of Bluetongue Virus Antibodies

易华山 1赵瑶 1马鲜平 1李欢 1夏宇 1朱文青 1刘倩如 1陈思倩 1曹慧贞 1姚婷 1高丽旭 1张金阳 2杨发挥 3魏晓蓉 4李前勇 1谢远兵5
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作者信息

  • 1. 西南大学动物医学院,重庆402460
  • 2. 昆明理工大学生命科学与技术学院,昆明650500
  • 3. 重庆市荣昌区农业技术推广站,重庆402460
  • 4. 重庆纳比威特检测技术服务有限公司,重庆402460
  • 5. 重庆市永川区动物疫病预防控制中心,重庆402160
  • 折叠

摘要

旨在建立蓝舌病病毒(BTV)血清学ELISA抗体检测方法,本研究以原核表达并纯化的BTV NS4重组蛋白为包被抗原,通过反应条件优化,建立了一种BTV重组NS4蛋白的间接ELISA抗体检测方法.SDS-PAGE结果显示,获得大小约52 ku的NS4重组融合蛋白,主要在上清中存在,Western blot显示,纯化后的重组蛋白具有良好的抗原性.通过方阵试验进行了ELISA反应条件优化,确定了重组蛋白抗原最佳包被量为3.0μg·孔-1;血清最佳稀释倍数为1:200,酶标二抗最佳工作浓度为1:4000,临界值分别为0.29和0.35.上述以NS4蛋白作为包被抗原建立的BTV抗体间接ELISA方法检测敏感性可达1:1600;批内和批间重复性变异系数均小于10％;检测76份重庆地区牛群血清样品,阳性符合率为98％,阴性符合率为100％.本研究建立的间接ELISA方法为临床BTV血清抗体检测及BTV血清流行病学调查奠定了基础.

关键词

蓝舌病病毒/NS4基因/原核表达/间接ELISA

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基金项目

重庆市基础研究与前沿探索专项项目(cstc2018jcyjAX0615)

中央高校基本科研业务专项基金(XDJK2018C059)

中央高校基本科研业务专项基金(XDJK2018C060)

国家重点研发计划项目(2018YFD0501705)

出版年

2020
畜牧兽医学报
中国畜牧兽医学会

畜牧兽医学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.729
ISSN：0366-6964
被引量5
参考文献量9
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