摘要
本研究旨在构建一种新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的微滴式数字PCR方法(droplet digital PCR,ddPCR).以NDV F基因为靶基因,选取保守区域设计引物和探针,构建了NDV ddPCR.对ddPCR反应引物和探针浓度、退火温度进行了优化,并对该方法的灵敏度、特异性和重复性进行测定.试验结果表明,ddPCR的最佳引物和探针浓度分别为900和250 nmol·L-1,最佳的退火温度为55℃.ddPCR的线性良好,最低检测下限为1.8 copies·μL-1,与禽传染性支气管炎病毒等其他6种病毒无交叉反应,样本重复的变异系数为2.4％.结果提示,本研究建立的ddPCR方法灵敏度高、特异性强,可对新城疫病毒感染的临床样品进行定量检测.
基金项目
北京市科委重大专项首都食品质量安全保障课题(Z171100001317013)
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