摘要
本研究旨在建立β-内酰胺类、四环素类、氨基苷类、酰胺醇类、磺胺类抗菌药物耐药基因的多重PCR检测方法,用于耐药基因的快速检测.根据GenBank公布的上述5类抗菌药物的耐药基因序列,设计17对特异性引物.通过优化PCR体系和反应程序,建立4组耐药基因(cat+f loR+tetB+tetC;d f rA12+sul2+sul1+blaCTX-M+balTEM-1;aac3+aph3+aadA1+strB;tetA+cmlA+strA+sul3)的多重PCR反应体系.然后,检测多重PCR方法的特异性和敏感性.利用建立的多重PCR方法检测42株禽致病性大肠杆菌的耐药基因,同时,检测其耐药性,比较分析耐药基因和耐药表型之间的相关性.结果显示,建立的4组多重PCR体系可有效扩增出17个耐药基因片段,测序结果表明特异性较好.敏感性结果表明,4组多重PCR体系的菌液敏感性分别为103、104、104和105 CFU.禽致病性大肠杆菌分离株的耐药基因多重PCR和单重PCR检测结果一致,其携带的耐药基因和耐药表型的符合率为92.86％.本研究建立的耐药基因多重PC R方法能简便、快速地检测常见的耐药基因,可用于耐药基因的传播、流行调查.
基金项目
国家重点研发计划项目(2016YFD0500800)
国家重点研发计划项目(2018YFE0102200)
上海浦江人才计划(2019PJD057)
兵团财政科技计划项目(2020AB025)
中央级公益性科研院所基本科研业务费(2020JB03)
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