畜牧兽医学报2021，Vol.52Issue(1) ：144-153.DOI:10.11843/j.issn.0366-6964.2021.01.015

基于H蛋白表位合成肽的小反刍兽疫病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

Establishment of an iELISA Method for Detection of Antibody againist Peste des Petits Ruminants Virus Based on H Protein Epitope Peptide

钱榜 李彦敏 朱学亮 张学燕 Niyokwishimira Alfred 窦永喜 张志东
畜牧兽医学报2021，Vol.52Issue(1) ：144-153.DOI:10.11843/j.issn.0366-6964.2021.01.015
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基于H蛋白表位合成肽的小反刍兽疫病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

Establishment of an iELISA Method for Detection of Antibody againist Peste des Petits Ruminants Virus Based on H Protein Epitope Peptide

钱榜 1李彦敏 2朱学亮 1张学燕 1Niyokwishimira Alfred 1窦永喜 1张志东2
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作者信息

  • 1. 中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,兰州730046
  • 2. 中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,兰州730046;西南民族大学畜牧兽医学院,成都610041
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摘要

本研究旨在建立针对小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)H蛋白抗体的iELISA检测方法.以筛选的H蛋白B细胞表位为基础,选择反应原性较好的4个抗原表位肽串联后合成作为包被抗原,优化各步反应条件及筛选各种缓冲液,并确定检测临界值.经优化后,多表位抗原肽的最佳包被量为1.5×10-6μg•孔-1,血清临界稀释度为1 ∶ 100,酶标二抗最佳稀释度为1∶ 80 000;包被液为碳酸氢盐缓冲液,血清和二抗稀释液均为PBST溶液,封闭液为2％BSA溶液;阴、阳性临界值为0.25.不同血清的检测结果表明,批内及批间检测结果变异系数均小于10％,证明该方法具有良好的稳定性;对羊痘、口蹄疫、蓝舌病阳性血清的检测均为阴性,说明该方法具有良好的特异性;与ID-Vet公司的cELISA试剂盒对306份临床血清平行检测,两者相对符合率为92.81％.该研究所建立的PPRV H蛋白抗体iELISA检测方法特异、稳定、敏感,操作比cELISA简便快捷,省时省力,可用于临床小反刍兽疫抗体检测.

关键词

小反刍兽疫病毒/H蛋白/B细胞表位/iELISA

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基金项目

国家重点研发计划项目(2016YFD0500108)

国家重点研发计划项目(2016YFD0500901)

国家绒毛用羊产业技术体系建设专项资金(CARS-39-13)

中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(Y2020GH19)

出版年

2021
畜牧兽医学报
中国畜牧兽医学会

畜牧兽医学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.729
ISSN：0366-6964
被引量7
参考文献量3
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