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基于H蛋白表位合成肽的小反刍兽疫病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

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本研究旨在建立针对小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)H蛋白抗体的iELISA检测方法.以筛选的H蛋白B细胞表位为基础,选择反应原性较好的4个抗原表位肽串联后合成作为包被抗原,优化各步反应条件及筛选各种缓冲液,并确定检测临界值.经优化后,多表位抗原肽的最佳包被量为1.5×10-6μg•孔-1,血清临界稀释度为1 ∶ 100,酶标二抗最佳稀释度为1∶ 80 000;包被液为碳酸氢盐缓冲液,血清和二抗稀释液均为PBST溶液,封闭液为2％BSA溶液;阴、阳性临界值为0.25.不同血清的检测结果表明,批内及批间检测结果变异系数均小于10％,证明该方法具有良好的稳定性;对羊痘、口蹄疫、蓝舌病阳性血清的检测均为阴性,说明该方法具有良好的特异性;与ID-Vet公司的cELISA试剂盒对306份临床血清平行检测,两者相对符合率为92.81％.该研究所建立的PPRV H蛋白抗体iELISA检测方法特异、稳定、敏感,操作比cELISA简便快捷,省时省力,可用于临床小反刍兽疫抗体检测.
Establishment of an iELISA Method for Detection of Antibody againist Peste des Petits Ruminants Virus Based on H Protein Epitope Peptide

钱榜、李彦敏、朱学亮、张学燕、Niyokwishimira Alfred、窦永喜、张志东

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中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,兰州730046

西南民族大学畜牧兽医学院,成都610041

小反刍兽疫病毒 H蛋白 B细胞表位 iELISA

国家重点研发计划项目国家重点研发计划项目国家绒毛用羊产业技术体系建设专项资金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项

2016YFD05001082016YFD0500901CARS-39-13Y2020GH19

2021

10.11843/j.issn.0366-6964.2021.01.015

畜牧兽医学报
中国畜牧兽医学会

畜牧兽医学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.729
ISSN：0366-6964
年,卷(期)：2021.52(1)
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