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共表达牛病毒性腹泻病毒E0基因和牛传染性鼻气管炎病毒gD基因的重组质粒DNA构建及其对小鼠的免疫效应

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本研究计划构建能同时表达牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)优势抗原基因的重组质粒并研究其免疫效果,旨在为BVD-IBR二联核酸疫苗的研制提供参考.采用PCR扩增目的基因E0及gD并将其依次连接至真核表达载体pVAX1-1RES中,构建pVAXl-E0-IRES-gD重组真核表达载体;将pVAX1-E0-IRES-gD转染至293T细胞中,间接免疫荧光法检测目的基因在细胞中的表达情况;将pVAX1-E0-IRES-gD以不同剂量采用肌内注射的方式接种小鼠,通过抗体水平和细胞因子检测以及脾淋巴细胞增殖试验对该重组质粒的免疫效果进行评价.结果表明,成功构建pVAX1-E0-IRES-gD重组质粒,目的基因在293T细胞内成功表达.在抗体和细胞因子水平以及脾淋巴细胞增殖能力这3个指标,重组质粒组均极显著高于空载体和阴性对照组,高剂量免疫组优于中、低剂量组;另外,高剂量重组质粒免疫组与二联灭活疫苗组相比无显著性差异.结果显示,成功构建了共表达BVDV E0和IBRVgD基因的重组质粒,体外表达检测证明目的蛋白具有良好的反应原性,动物免疫试验证明其能刺激机体产生良好免疫应答.
Construction of a Recombinant Plasmid Co-expressing Bovine Viral Diarrhea Virus E0 Gene and Infectious Bovine Rhinotracheitis Virus gD Gene and Consider Its Immune Effect on Mice

马小静、李梦莹、张淮瑜、宋阿北、许立华、吴心华、张巧娥、李继东

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宁夏大学农学院,银川750021

牛病毒性腹泻病毒 E0 牛传染性鼻气管炎病毒 gD 重组质粒 共表达 免疫效果

宁夏回族自治区重点研发计划东西部科技合作项目"十三五"国家重点研发计划项目宁夏回族自治区重点研发计划项目宁夏自然科学基金宁夏回族自治区育种专项

2017BY0782018YFD05017002018BBF330032018AAC030112019NYYZ05

2021

10.11843/j.issn.0366-6964.2021.01.016

畜牧兽医学报
中国畜牧兽医学会

畜牧兽医学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.729
ISSN：0366-6964
年,卷(期)：2021.52(1)
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