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鉴别非洲猪瘟病毒和猪瘟病毒野毒株二重TaqMan MGB实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

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旨在建立特异、敏感的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,用于非洲猪瘟病毒(ASFV)和猪瘟病毒(CSFV)野毒株的快速鉴别检测.针对ASFV的P72基因和CSFV野毒株的5'UTR非编码区序列的保守区域分别设计1对特异性引物和1条探针,经优化反应条件,建立一种基于TaqMan MGB探针技术的FQ-PCR方法,验证方法的敏感性、特异性和稳定性,对50份临床样品进行检测,并与猪瘟国标方法及OIE推荐的非洲猪瘟检测方法进行比较分析.结果显示:建立的鉴别ASFV和CSFV野毒株二重FQ-PCR检测方法在100～106拷贝•μL-1模板范围内有良好的线性关系;对ASFV和CSFV基因出现阳性扩增信号,但对猪瘟病毒疫苗株、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪乙型脑炎病毒、副猪嗜血杆菌等病原对照未出现扩增;批内、批间试验变异系数在1.18％～2.08％,重复性良好;对ASFV和CSFV的最低检测模板浓度均为10拷贝•μL-1;利用建立的二重FQ-PCR方法对50份临床样品进行检测,检测结果与猪瘟国标方法及OIE推荐的非洲猪瘟检测方法结果完全一致.本研究成功建立了鉴别ASFV和CSFV野毒株二重TaqMan MGB FQ-PCR方法,为ASFV和CSFV野毒株的鉴别诊断提供了快速、敏感、特异且能满足临床检测需求的检测方法.
Establishment and Application of a Duplex TaqMan MGB FQ-PCR for Differential Detection of African Swine Fever Virus and Classical Swine Fever Virus Wild Strains

王淑娟、班付国、王东方、刘影、赵雪丽、谢彩华、王翠、马震原、杨海波、柴茂、闫若潜

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河南省动物疫病预防控制中心,郑州450008

非洲猪瘟病毒 猪瘟病毒野毒株 二重TaqMan MGB FQ-PCR 检测

河南省科技创新领军人才

204200510012

2021

10.11843/j.issn.0366-6964.2021.01.018

畜牧兽医学报
中国畜牧兽医学会

畜牧兽医学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.729
ISSN：0366-6964
年,卷(期)：2021.52(1)
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