摘要
为研究沙门菌引致IPEC-J2损伤的分子机制,试验用沙门菌刺激IPEC-J2,在特定时间收集细胞及其培养上清液,采用荧光定量PCR或ELISA检测细胞紧密连接蛋白、炎症反应相关蛋白和细胞增殖相关蛋白的表达以及乳酸脱氢酶(LDH)含量,以确定该沙门菌能够引起IPEC-J2损伤,并进一步采用NF-κB抑制剂和小干扰RNA预处理IPEC-J2,分析了NF-κB/β-catenin信号通路在沙门菌引起IPEC-J2损伤中的调控作用.结果显示,与对照组相比,沙门菌感染组紧密连接蛋白ZO-1和Occludin mRNA表达量在感染后6和24 h呈极显著下降(P＜0.01);促炎性细胞因子TNF-c和IL-8的生成量以及LDH释放量在感染后6、12和24 h呈极显著上升(P＜0.01),NF-κB p65的mRNA表达在感染后1、3和6h也呈极显著上升(P＜0.01);细胞增殖蛋白cyclin D1 和c-Myc的mR-NA 表达在感染后6、12和24 h呈显著下降(P＜0.05),其转录调控因子β-catenin的mRNA表达在感染后24 h呈极显著下降(P＜0.01).与沙门菌感染组相比,抑制剂+沙门菌感染组ZO-1和Occludin的mRNA表达量在12和18 h呈极显著增高(P＜0.01),而NF-κB p65、TNF-α和IL-8的表达以及LDH释放量在各时间点均呈极显著降低(P＜0.01);siRNA-β-catenin+沙门菌处理组的β-catenin、cyclin D1和c-Myc的表达量在各时间点均呈极显著降低(P＜0.01),LDH释放量在6和12 h均呈极显著增加(P＜0.01),但在18 h增加不显著(P＞0.05).本试验结果表明,沙门菌激活了NF-KB信号通路,促进了促炎性细胞因子的生成,加重了细胞损伤;同时,沙门菌抑制了β-cate-nin信号通路,降低了细胞增殖蛋白和紧密连接蛋白的表达,影响了细胞修复,从而出现细胞损伤与细胞修复之间的失调,最终呈现出细胞损伤.本试验从NF-κB/β-catenin信号通路的角度揭示了沙门菌引致IPEC-J2损伤的分子机制.
基金项目
国家自然科学基金(31702147)
天津市高校"中青年骨干创新人才培养计划"()
天津市高校"学科领军人才培养计划"()
天津市"131"创新型人才团队(20180338)
天津市自然科学基金(20JCZDJC00190)
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