奶牛乳腺炎是指在不同理化因素刺激下奶牛乳腺的炎性反应,其严重影响了奶牛养殖业的健康发展.许多细胞因子是炎症调节剂,但与奶牛乳腺炎相关的关键细胞因子还未被鉴定.异体移植炎症因子1(allograft in-flammatory factor-1,AIF-1)在免疫调节中扮演重要角色,并在多种炎性疾病中过量表达.因此,本研究探讨了牛AIF-1在乳腺炎中的可能作用.首先,利用ELISA试剂盒检测了乳腺炎牛奶中牛AIF-1的含量,并用RT-PCR方法克隆牛AIF-1基因,然后,用亲和层析纯化牛AIF-1蛋白.用此重组蛋白刺激牛乳腺上皮细胞,ELISA试剂盒检测肿瘤坏死因子α、白细胞介素6和单核细胞趋化蛋白1的分泌,Western blot测定IκBα的磷酸化.结果显示,患乳腺炎奶牛乳中AIF-1的平均含量显著高于健康奶牛,而抗生素治愈后的奶牛乳中AIF-1的含量回落到正常水平.这些结果提示,牛AIF-1是一个分泌型蛋白,可能与乳腺炎相关.为了进一步探索这种关系,本研究克隆了牛AIF-1基因并纯化了牛AIF-1蛋白.此蛋白上调了牛乳腺上皮细胞肿瘤坏死因子α、白细胞介素6和单核细胞趋化蛋白1的分泌,并刺激了IκBα的磷酸化.IκBα磷酸化抑制剂BAY 11-7085阻断了牛AIF-1刺激的炎性细胞因子上调.综上表明,牛AIF-1通过核因子KB信号促进了牛乳腺上皮细胞炎症因子的释放.
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