摘要
旨在研究BMP4对睾丸支持细胞增殖的调控.本试验选取0、1、2和3月龄组的健康大足黑山羊公羊各3只,采集睾丸支持细胞,每次试验均设3个生物学重复和3次技术重复,通过体外培养、细胞免疫荧光、基因干扰、过表达、qPCR和Western blotting等技术对BMP4是否通过Id2对山羊睾丸支持细胞进行调控以及它们的调控关系进行验证.结果发现,BMP4在2月龄组大足黑山羊睾丸支持细胞中的表达量极显著高于0、1月龄组(P<0.01);在一定范围内,随着BMP4浓度的增加睾丸支持细胞的增殖活性有所增强,BMP4浓度为200ng·mL-1时其增殖能力最强(P<0.05);干扰BMP4后,细胞增殖活力显著下降(P<0.05),但在72h后回到正常水平(P>0.05),PCNA的表达极显著降低(P<0.01),表明干扰BMP4后细胞的增殖能力受到限制,细胞增殖指数测定结果进一步说明,干扰BMP4后细胞的增殖能力受到限制;过表达BMP4后,Id2基因表达水平极显著增加(P<0.01),表明BMP4对Id2具有正向调控作用;相对过表达BMP4再干扰Id2试验组,干扰Id2试验组的PC-NA基因的表达水平显著降低(P<0.05),这进一步证明BMP4可以调控该基因和蛋白表达.综上所述,山羊睾丸支持细胞的增殖活力在一定范围内与BMP4的浓度呈正相关;且BMP4能够正向调控Id2的表达,并通过促进Id2的表达进而促进支持细胞的增殖.本研究为阐明BMP4调控山羊睾丸支持细胞的分子机制和生理功能提供了基础.
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