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检测山羊嵴病毒的实时荧光定量PCR方法的建立和应用

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山羊嵴病毒(caprine kobuvirus,CKoV)是国内山羊新发病毒,本试验目的是建立检测CKoV的实时荧光定量PCR方法,并对西南三省腹泻山羊粪样进行该病毒的检测.选择CKoV最保守的3D基因序列,设计3D基因引物,初步设计实时荧光定量PCR,经优化反应条件和反应体系,成功建立了检测CKoV的TB Green染料法实时荧光定量PCR方法.该方法在病毒浓度2.23×102～2.23×108 copies· μL-1范围内线性关系良好,相关系数为0.9992,扩增效率为110％;此方法具有良好的特异性和稳定性,最低检测限为2.23×101 co pies·μL-1.采用所建立的方法对2020年1—4月采集自四川、云南和重庆的共15个场79份山羊腹泻粪样本进行检测,结果CKoV的平均检出率为25.3％,场阳性率为53.3％.并且本试验获得了13个完整的CKoV 3D基因,遗传进化分析表明这13个3D基因具有独特的进化趋势.本研究为CKoV的分子检测提供了一种新的技术手段和基础流行病学数据.
Establishment and Application of a Real Time Fluorescent Quantitative PCR Assay for Detecting Caprine Kobuvirus

阿比克哈莫、余忠华、景志忠、汤承

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中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室,兰州730046

阿坝藏族羌族自治州动物科学技术研究所,红原624400

西南民族大学畜牧兽医学院,成都610041

山羊嵴病毒 实时荧光定量PCR方法 山羊 腹泻

"十三五"国家重点研发计划西南民族大学新发动物疫病创新团队动物医学四川省高等学校重点实验室平台项目

2016YFD05009072020 NTD022020PTJS29001

2021

10.11843/j.issn.0366-6964.2021.05.020

畜牧兽医学报
中国畜牧兽医学会

畜牧兽医学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.729
ISSN：0366-6964
年,卷(期)：2021.52(5)
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