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金黄色葡萄球菌表面蛋白A对奶牛乳腺上皮细胞的黏附作用

The Adhesion Effect of Staphylococcus aureus Surface Protein A on Dairy Cattle Mammary Epithelial Cells

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本试验拟探究金黄色葡萄球菌(金葡菌)表面蛋白A(Staphylococcus aureus surface protein A,SasA)编码基因在奶牛乳源金葡菌中是否具有普遍性及同源性,并结合蛋白结构组成研究SasA对奶牛乳腺上皮细胞的黏附作用.试验前期从中国北方5个荷斯坦牛场无菌条件下分离纯化了73株奶牛乳源金黄色葡萄球菌菌株,PCR扩增鉴定S asA基因并进行序列保守性分析.利用原核表达系统表达SasA蛋白的丝氨酸富集片段1(serine-rich re-peat region 1,SRR1)及非重复区域(non-repeat region,NRR)并进行蛋白纯化.利用流式细胞仪检测NRR,牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)及SRR1对奶牛乳腺上皮细胞(Mac-T)黏附性差异.为进一步在NRR中定位发挥主要黏附作用的片段,试验采用了长度不同的NRR片段与完整NRR片段做竞争性黏附处理.PCR扩增产物鉴定及序列同源性分析结果显示,86.3％ 的牛源金葡菌菌株含S asA基因且序列一致性超过95％.相较于SRR1和BSA,NRR对细胞具有更强的黏附性.黏附抑制试验结果表明,NRR1-2片段(230—540 aa)对NRR抑制作用最明显.综上表明,SasA基因在奶牛乳源金葡菌中具有普遍性,该基因序列具有高度的保守性.在SasA蛋白中,对奶牛乳腺上皮细胞起主要黏附作用的为N RR1-2片段,大致定位在其结构域的230—540位氨基酸.本研究结果表明,与该区域结合的受体中可能存在SasA作为黏附素与奶牛乳腺上皮细胞互作的位点.

张金柠、钱梦樱、唐永杰、米思远、师科荣、俞英

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中国农业大学动物科技学院,北京100193

山东农业大学动物科学技术学院,泰安271018

金黄色葡萄球菌 金葡菌表面蛋白A 奶牛乳腺上皮细胞 黏附作用

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319611430096182021BAIC0631272420CARS-36

2021

10.11843/j.issn.0366-6964.2021.05.022

畜牧兽医学报
中国畜牧兽医学会

畜牧兽医学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.729
ISSN：0366-6964
年,卷(期)：2021.52(5)
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