摘要
旨在探究miR-148a-3p是否通过靶基因PPARγ调节鹅卵泡颗粒细胞中类固醇激素的合成.本研究选用12只健康的处于产蛋高峰期的天府肉鹅母系母鹅分别用于组织样品采集和颗粒细胞培养.利用qPCR检测miR-148a-3p在鹅不同阶段卵泡颗粒层中的表达;通过MEGA7软件分析miR-148a-3p在不同物种的保守性,预测miR-148a-3p的靶基因,采用双荧光素酶报告试验验证miR-148a-3p与靶基因的靶标关系;在鹅颗粒细胞中转染miR-148a-3p mimics和inhibitor,qPCR检测miR-148a-3p对靶基因及其下游基因表达水平的影响;同时利用ELISA技术检测激素含量的变化.结果 表明,miR-148a-3p在不同物种中高度保守;在鹅卵泡发育过程中,miR-148a-3p的表达量随卵泡直径的增加呈先升高后下降的趋势.在鹅卵泡颗粒细胞体外培养过程中,miR-148a-3p mimics能显著下调3β-HSD的表达(P＜0.05),抑制孕酮的合成(P＜0.05);而miR-148a-3p inhibitor的作用则相反(P＜0.05).生物信息学分析和双荧光素酶报告试验证实,PPARγ为miR-148a-3p的靶基因.在颗粒细胞中,miR-148a-3p mimics能显著降低PPARγ的表达(P＜0.05),而miR-148a-3p inhibitor能显著上调PPARγ的表达(P＜0.05).当干扰PPARγ后,3β-HSD的表达量显著降低(P＜0.05),孕酮的含量也降低.这些结果表明,在鹅等级卵泡颗粒细胞中,miR-148a-3p可靶向结合PPARγ来抑制3β-HSD的表达,从而降低颗粒细胞孕酮的合成.
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