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反刍动物埃立克体荧光定量PCR检测技术的建立和应用

Establishment and Application of Real-time PCR Assays for Detection of Ehrlichia ruminantium

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为快速、准确地检测反刍动物埃立克体,本研究以反刍动物埃立克体pCS20为靶基因设计特异性引物和探针,建立了 TaqMan和Eva Green荧光定量PCR方法,对其反应的特异性、敏感性和重复性进行了分析,并与OIE推荐的套式PCR方法一起对临床样品进行检测.结果显示,本方法特异性强,与牛巴贝斯虫、牛双芽巴贝斯虫、环形泰勒虫、犬埃立克体、牛埃立克体、马埃立克体和立氏埃立克体无交叉反应;TaqMan和Eva Green荧光定量PCR对pCS20质粒标准品的最低检测限分别为17.4拷贝·μL-1和1.74拷贝·μL-1,标准曲线相关系数大于0.99,组内和组间CV均小于1.5%.对420只钝眼蜱样本的检测显示,TaqMan和Eva Green荧光定量PCR的检出率分别为25.48%和29.29%,与套式PCR检测方法相比,敏感性更高.本研究为反刍动物埃立克体的检测和流行病学调查提供了一种快速、准确的检测方法.

王素华、王忠才、黄凌哲、莫虹斐、吴绍强、吕继洲、赵治国、帅江冰

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杭州海关技术中心,杭州310012

中国检验检疫科学研究院动物检疫所,北京100029

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反刍动物埃立克体 pCS20基因 TaqMan荧光定量PCR Eva Green荧光定量PCR

LGN19C1800012020HK156

2021

畜牧兽医学报
中国畜牧兽医学会

畜牧兽医学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子:0.729
ISSN:0366-6964
年,卷(期):2021.52(7)
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