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禽腺病毒血清4型Fiber2蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定

Preparation of the Monoclonal Antibody against the Serotype 4 Fowl Adenovirus Fiber2 Protein and Identification of the Antigenic Epitope

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旨在制备禽腺病毒血清4型(FAdV-4)纤突蛋白(Fiber2)的特异性单克隆抗体(MAb),本研究将原核表达的可溶性重组蛋白NusA-Fiber2作为免疫原免疫BALB/c雌鼠,筛选获得3株能稳定分泌抗FAdV-4 Fiber2蛋白MAb的杂交瘤细胞株2G5、2G8、4C2,取细胞株2G5制备腹水并纯化,利用间接免疫荧光试验(immunofluores-cence assay,IFA)和Western blot鉴定该单抗的特异性.用制备的单抗包被酶标板,通过一系列的优化,建立了FAdV-4 Fiber2双抗夹心ELISA检测方法.通过逐步截短分析鉴定出单克隆抗体识别的抗原表位区域.结果表明:成功获取3株单克隆细胞株2G5、2G8、4C2.MAb 2G5可与原核表达纯化的Fiber2蛋白及FAdV-4特异性反应.建立的双抗夹心ELISA检测方法具有很好的特异性、灵敏性和重复性.该MAb识别的表位序列是N端aa1-33.本研究成功制备了具有良好Western blot 和 IFA反应原性的单克隆抗体,为Fiber2蛋白功能研究和FAdV-4新型表位疫苗商品化研发奠定了基础.

郭瑞珍、苏冰倩、王棋、王一、于朋伟、孟洁洁、齐艳丽、杨国宇、褚贝贝

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河南农业大学农业部动物生化与营养重点开放实验室,郑州450002

禽腺病毒血清4型 Fiber2蛋白 单克隆抗体 双抗夹心ELISA 表位鉴定

2016ZX08006001-006

2021

10.11843/j.issn.0366-6964.2021.07.022

畜牧兽医学报
中国畜牧兽医学会

畜牧兽医学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.729
ISSN：0366-6964
年,卷(期)：2021.52(7)
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