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利用单碱基编辑系统定点编辑哈萨克羊MSTN基因的研究

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肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)可负调控骨骼肌的发育.本研究利用胞嘧啶碱基编辑器(cytidine base editor,CBE)在哈萨克羊MSTN基因编码区提前引入终止密码子,以期达到敲除MSTN基因的目的 .共设计2条靶向哈萨克羊MSTN基因不同外显子的sgRNAs,分别连接至pGL3-U6-sgRNA-PGK-puromycin质粒,并与pCMV-AncBE4 max-P2A-GFP质粒共转染哈萨克羊胎儿成纤维细胞,经CruiserTM酶酶切检测、Sanger测序和TA克隆分析.结果 显示,成功筛选出可以在哈萨克羊MSTN基因外显子提前引入终止密码子的2条sgRNAs,其中STOPsg-1靶位点编辑效率为26.7％,STOPsg-2靶位点的编辑效率为6.7％.本研究成功运用CBE(AncBE4 max)技术在哈萨克羊胎儿成纤维细胞MSTN基因编码区实现定点编辑,为培育精确编辑MSTN基因的哈萨克羊奠定基础.
Study of Kazakh Sheep MSTN Gene Site-directed Editing Based on the Base Editing System

姚旭东、蒙亚琦、任秀美奥、郭延华、唐红、张译元、王立民、周平

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石河子大学动物科技学院,石河子832000

新疆农垦科学院省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室,石河子832000

哈萨克羊 单碱基编辑 MSTN

2016ZX080080012021CB032316603412013KLS05

2021

10.11843/j.issn.0366-6964.2021.08.009

畜牧兽医学报
中国畜牧兽医学会

畜牧兽医学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.729
ISSN：0366-6964
年,卷(期)：2021.52(8)
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