摘要
旨在探讨miR 133c 3p在猪流行腹泻病毒(PEDV)引起的细胞凋亡过程中所起的作用,并探讨其发挥作用的机制.以PEDV感染MARC-145细胞为模型,检测PEDV感染过程中细胞的凋亡情况以及6个与凋亡相关mi-croRNAs的表达差异,RT-qPCR检测PEDV感染过程中与凋亡相关microRNAs的表达差异,合成miR-133c-3p的模拟物和抑制剂,转染MARC-145细胞,采用流式细胞术检测PEDV感染MARC-145细胞的凋亡情况,流式细胞术检测过表达和敲低miR-133c-3p后细胞的凋亡情况,采用生物信息学方法预测miR-133c-3p的靶基因,荧光素酶报告基因检测了miR-133c 3p和靶基因的结合情况,Western blot检测了过表达miR-133c 3p对BCL w和PEDV蛋白表达水平的调控,用siRNA敲低BCL w蛋白检测细胞凋亡情况.结果 显示,PEDV的感染可以诱导MARC-145细胞凋亡(P＜0.05),与凋亡相关的microRNAs,如miR-133c 3p和miR-1495p的表达上调(P＜0.05;P＜0.001),miR-138-3p的表达下调(P＜0.05).其中,miR-133c-3p在病毒感染后升高了约5倍(P＜0.01).过表达miR-133c-3p后,细胞凋亡率显著升高(P＜0.01);敲低miR-133c-3p后,细胞凋亡率降低(P＜0.05).用生物信息学方法预测miR-133c-3p与BCL2L2的3'UTR区域有结合位点,荧光素酶报告基因试验显示miR-133c-3p可以和BCL2L2基因靶向结合(P＜0.01),过表达miR-133c-3p后细胞内BCL-w蛋白的表达明显下调,且病毒的感染可以降低BCL-w的表达水平,敲低BCL-w后细胞凋亡率显著升高(P＜0.01).PEDV感染后可以通过上调miR-133c-3p的表达来下调BCL2L2的表达,从而促进细胞的凋亡.
国家科技期刊平台
NSTL
维普
万方数据