摘要
本试验旨在探究脱氧雪腐烯醇(DON)对牛卵母细胞体外成熟发育的影响及其作用机制.将牛卵丘卵母细胞复合体分别在含DON浓度为0、50、250、500、1000ng.mL-1的体外成熟培养液中进行体外成熟,检测卵丘细胞扩展程度及第一极体排出率,构建DON毒性模型.然后,借助此模型研究DON对卵母细胞的线粒体分布及后续受精卵裂率、囊胚发育率的影响,探究DON对牛卵母细胞体外成熟及后续发育能力的影响;通过检测体外成熟卵母细胞内的氧化相关因子(ROS、GSH)水平和抗氧化基因CAT、GPx4的mRNA表达量,揭示DON影响牛卵母细胞体外发育能力的分子机制.结果 表明,250、500 ng·mL-1的DON显著抑制卵母细胞的第一极体排出(P＜0.05),1000 ng.mL-1的DON极显著抑制第一极体排出(P＜0.01);250 ng·mL-1的DON显著抑制卵丘卵母细胞扩展(P＜0.05),500、1000 ng·mL-1的DON极显著抑制卵丘细胞扩展(P＜0.01);后续试验选取DON浓度为500 ng·mL-1作为毒性模型(DON组),与不含DON组(对照组)进行比较研究,结果发现,对照组与DON组的线粒体均匀分布比例(60.2％ vs.40.0％)存在显著差异(P＜0.05);试验组较对照组的受精卵裂率(33.6±3.6％vs.(67.7±2.6)％)及早期囊胚率((0.0±0.0)％ vs.(18.3±2.2)％)均显著降低(P＜0.05);试验组较对照组,卵母细胞内ROS水平(1.6 vs.1.0)显著升高(P＜0.05),GSH相对水平(0.4 vs.1.0)显著降低(P＜0.05),抗氧化基因CAT与GPx4的mRNA相对表达量(0.0vs.1.0;0.6 vs.1.0)显著降低(P＜0.05).以上研究表明,DON对卵母细胞的体外成熟及早期胚胎发育具有抑制作用,其作用机制与DON破坏牛卵母细胞内抗氧化系统平衡相关.
基金项目
河北省重点研发计划(19226635D)
天津市奶牛产业岗位技术体系(ITTCRS2017000)
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