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猪C1QTNF3基因可变剪接体的鉴定及介导miR-101调控成脂分化的研究

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旨在研究猪C1QTNF3基因可变剪接体的特性及miR-101通过C1QTNF3基因促进猪脂肪SV细胞成脂分化的机制.本研究采集3头30日龄健康马身猪仔公猪心、肝、脾、肺、肾、胃、股二头肌、腰大肌、皮下脂肪和背部脂肪组织样品,首先利用RT-PCR技术和生物信息学方法对C1QTNF3基因的不同转录本进行扩增和生物学特性分析,采用qRT-PCR技术检测C1QTNF3基因不同转录本在猪组织中的表达变化.随后,利用生物信息学预测发现,C1QTNF3上游的调控因子是miR-101,采用双荧光素酶报告试验验证miR-101对C1QTNF3的调控作用.最后,利用油红0染色和qRT-PCR技术检测过表达miR-101对猪脂肪SV细胞成脂分化的影响.基因克隆得到猪C1QTNF3存在两个转录本C1QTNF3和C1QTNF3-1,其中C1QTNF3-1为新鉴定的转录本;测序分析显示,与C1QTNF3相比,C1QTNF3-1的第1外显子区域缺失了219个碱基,少编码73个氨基酸.进化树分析显示,猪C1QTNF3和C1QTNF3-1蛋白序列与人和马来亚穿山甲等物种的亲缘关系较近.C1QTNF3和C1QTNF3-1在猪各组织中均有表达,且在各组织中C1QTNF3-1的表达量均极显著高于C1QTNF3(P＜0.01).过表达miR-101极显著下调C1QTNF3 3'UTR区域的荧光素酶活性(P＜0.01)和C1QTNF3 mRNA的表达(P＜0.01),同时增加了脂肪细胞成脂分化关键基因PPARγ、C/EBPβ、SREBP-1c和FABP4的mRNA表达量(P＜0.01).本试验成功克隆了猪C1QTNF3基因的两个可变剪接体,其中C1QTNF3-1在猪不同组织中均高表达,推测该转录本为基因发挥功能的主要亚型.并深入研究了C1QTNF3基因的上游调控因子,揭示了miR-101靶向C1QTNF3促进成脂分化的机制,丰富了C1QTNF3的生物学作用和调控网络.
Study of Alternative Splicing of Porcine C1QTNF3 Gene and Its Regulation on Adipogenesis by Mediating miR-101

杨阳、张雪莲、张万锋、李文霞、李文新、蔡春波、路畅、高鹏飞、郭晓红、李步高、曹果清

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山西农业大学动物科学学院,太谷030801

猪 C1QTNF3基因 成脂分化 miR-101 可变剪接

三晋学者支持计划专项三晋学者支持计划专项国家自然科学基金山西省"1331"工程项目山西省青年基金山西省优秀博士奖励项目山西农业大学科技创新项目

2016201731872336J201811301201901D211369SXYBKY20190302020BQ01

2021

10.11843/j.issn.0366-6964.2021.011.006

畜牧兽医学报
中国畜牧兽医学会

畜牧兽医学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.729
ISSN：0366-6964
年,卷(期)：2021.52(11)
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