摘要
旨在克隆血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2)基因,分析其结构特性和表达特征.本试验以45和90日龄的健康雪山草鸡为研究对象,利用PCR技术扩增ACE2基因的编码区序列;运用生物信息学方法对其结构特征进行分析;通过TA克隆构建黄羽肉鸡ACE2编码区序列质粒标准品,使用绝对定量方法测定ACE2基因在45和90日龄雪山草鸡公母鸡各组织中的表达特性.结果,克隆得到2 427 bp的编码区序列,共编码808个氨基酸,与白羽肉鸡一致,但是在黄羽肉鸡序列中存在大量突变位点造成编码氨基酸发生变化.同源性比较发现,其与红色原鸡的同源性为99％,其次为绿头鸭88％,与其它动物的同源性为73％～76％.生物信息学分析发现,ACE2属于Ⅰ型跨膜蛋白,即分泌型蛋白,信号肽位于1～17 aa,含有46个蛋白质磷酸化位点.定量结果发现,小肠中ACE2表达量显著高于其它组织.法氏囊、气管、胆囊和脾中ACE2表达量较低,脾中表达量最低.母鸡空肠、盲肠、脾和肺中ACE2基因表达量显著高于公鸡.公鸡肾和心中ACE2基因表达量显著高于母鸡.90日龄雪山草鸡的十二指肠、空肠、肺、脾和回肠组织ACE2基因表达量均显著低于45日龄雪山草鸡,在法氏囊和肾组织中结果呈相反趋势.通过克隆获得了雪山草鸡ACE2基因编码区序列,生物信息学分析发现,雪山草鸡ACE2基因在家禽中较为保守;ACE2基因表达规律呈现出在雪山草鸡肠道组织中高于其他组织,母鸡中高于公鸡,随着时间表达水平呈下降趋势.研究结果为开展ACE2基因在黄羽肉鸡肠道中的功能研究奠定了理论基础.
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