摘要
分析2013-2019年中国西北部分省区不同基因亚型牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗原基因Erns的分子特征,了解其遗传演化规律.从甘肃、青海、宁夏规模化牛场送检的疑似牛病毒性腹泻发病牛150份EDTA抗凝血提取总RNA,利用RT-PCR扩增病毒基因组Ens-E1区,克隆测序后比对,构建系统进化树进行遗传演化关系分析.利用牛肾细胞MDBK对检出的不同基因亚型BVDV进行分离,并鉴定其生物型.RT-PCR扩增结果表明,BVDV总体阳性率为37.33％,其中甘肃省、青海省、宁夏回族自治区BVDV阳性率分别为37.68％、35.71％、40.00％.获得56份Erns-E1DNA,克隆测序获得33条不同的Erns序列,长度均为681 bp,分析表明流行株分属10个BVDV基因亚型:BVDV-1a(2株)、BVDV-1b(5株)、BVDV-1c(1 株)、BVDV-1d(3株)、BVDV-1m(11 株)、BVDV-1o(1 株)、BVDV-1p(4株)、BVDV-1q(4株)、BVDV-1v(1 株)、BVDV-2a(1 株).分离获得BVDV-1a亚型、BVDV-1b亚型、BVDV-1v亚型、BVDV-2a亚型分离株各1株,BVDV-1 d亚型分离株2株,均为非致细胞病变型.各亚型株间Erns基因核苷酸相似性以BVDV-1a～1d经典亚型株(79.8％～85.9％)或1m～1q及1v新亚型株(81.0％～87.3％)较高,以 BVDV-1 m和BVDV-1p流行株亚型间相似性最高(87.3％).各亚型株Erns基因编码蛋白的RNA酶活性位点以及双链RNA作用基序(139KKGK142)保守,但Erns第26位糖基化位点(26 NRSL)在1m～1q、1v亚型株移位(24 NVSR).首次以Erns核苷酸序列构建系统进化树,结果显示1m～1q及1v等亚型BVDV株在进化上关系较为密切.本研究首次选用Erns靶标基因对甘肃、青海、宁夏部分省区牛源BVDV株进行同源性及系统进化分析,发现10个基因亚型流行株,以1m亚型株最为普遍,1m～1q及1v等亚型株亲缘关系密切.
基金项目
国家重点研发计划(2017YFD0500904)
宁夏农林科学院对外合作项目(DW-X-2018020)
国家肉牛牦牛产业技术体系建设项目(NBCIS)
国家肉牛牦牛产业技术体系建设项目(CARS-37)
农业科技创新工程项目(ASTIP)()
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