摘要
旨在探讨线粒体钙单向转运体(mitochondrial calcium uniporter,MCU)介导线粒体Ca2+转运是否参与低氧诱导的肉鸡心肌细胞线粒体损伤.试验通过分离白羽肉鸡鸡胚原代心肌细胞,在低氧条件下(3％O2,5％ CO2,92％ N2)培养24、48、72 h,同时使用RU360抑制MCU的表达并在低氧条件下处理72 h后,使用流式细胞术检测细胞内Ca2+浓度、线粒体Ca2+浓度、线粒体活性氧水平和线粒体膜电位,检测MCU及其调节因子的mRNA和蛋白表达.结果 显示,通过差速贴壁方法培养的心肌细胞纯度可达90％以上;低氧培养24 h,诱导心肌细胞MCU、MICU1 mRNA表达增加(P＜0.05),胞浆和线粒体内Ca2+浓度显著上升(P＜0.05),线粒体膜电位增加(P＜0.05);低氧培养48 h,诱导MCUR1和MICU1 mRNA表达减少(P＜0.05),细胞Ca2+浓度上升(P＜0.05);低氧培养72 h,诱导MCU mRNA表达增加(P＜0.01),细胞和线粒体内Ca2+增加(P＜0.01),线粒体膜电位下降(P＜＜0.01),活性氧增加(P＜0.01).低氧处理72 h后,与低氧组相比,RU360预处理组细胞和线粒体内Ca2+减少,线粒体膜电位上升,活性氧生成减少(P＜0.01),MCU mRNA表达减少(P＜0.01).结果 表明:低氧诱导MCU上调导致线粒体钙超载,促使线粒体功能降低并发生损伤,进而心肌细胞发生损伤;抑制MCU表达可以减轻低氧诱导的心肌细胞线粒体钙超载,保护线粒体.
基金项目
国家自然科学青年基金(31502131)
广东省自然科学基金(2021A151501047)
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