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基于酵母双杂交技术的绒山羊波形蛋白互作蛋白鉴定

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为进一步探索波形蛋白(vimentin)调控绒山羊绒毛生长的作用机制,以内蒙古遗传种子资源阿尔巴斯白绒山羊皮肤中的毛囊组织为材料,利用PCR技术和酵母双杂交技术对根据GenBank中山羊的vimentin蛋白序列,运用蛋白质互作在线软件预测和液相色谱质谱联用采集免疫共沉淀数据筛选出肌动蛋白(ACTB)和vimentin进行基因引物设计、克隆、酵母表达载体构建和蛋白互作鉴定.结果 显示:成功克隆出绒山羊vimentin基因CDS区序列的长度为1401 bp,ACTB基因CDS区序列的长度为1128 bp;构建了酵母表达载体;试验组共转化pGBKT7-vimentin与pGADT7-ACTB的Y2HGold菌株在二缺板SD/-Trp/-Leu/X-α-GaL/AbA培养基和四缺板SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade/X-α-GaL/AbA培养基上,均能生长出淡蓝色菌落,而在对照组共转化pGBKT7空质粒与pGADT7-ACTB重组质粒的二缺板SD/-Trp/-Leu/X-α-GaL/AbA培养基上长出白色菌落,表明共转化的pGBKT7-vimentin与pGADT-ACTB重组质粒的下游报告基因Lac被激活,共转化pGBKT7空质粒与pGADT7-ACTB重组质粒的下游报告基因Lac未被激活.提示:vimentin与ACTB两种蛋白间存在相互作用.
Identification of vimentin interaction protein of cashmere goats based on the yeast two-hybrid technology

肖红梅、胡小玉、梁加越、冯娟、王笑冰、王东

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内蒙古农业大学生命科学学院,内蒙古呼和浩特010010

内蒙古自治区生物制造重点实验室,内蒙古呼和浩特010010

中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京 100083

波形蛋白 酵母双杂交 互作蛋白 绒山羊 表达载体

国家自然科学基金国家自然科学基金内蒙古自治区自然科学基金

31860626321607782018MS03015

2022

畜牧与兽医
南京农业大学

畜牧与兽医

CSTPCD北大核心
影响因子：0.404
ISSN：0529-5130
年,卷(期)：2022.54(2)
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