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犬弓首蛔虫黏蛋白2的原核表达及多克隆抗体的制备

Prokaryotic Expression and Polyclonal Antibody Preparation of Toxocara canis Mucin-2

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根据犬弓首蛔虫(Toxocara canis)黏蛋白2的基因组数据(GenBank:AF167707),以T.canis成虫的基因组DNA为模板扩增Tc-muc-2基因并进行序列分析;同时构建Tc-muc-2/pCold TF原核表达载体,采用ITPG诱导表达,对重组蛋白进行纯化并制备多克隆抗体.结果显示Tc-muc-2基因全长序列为549 bp,共编码183个氨基酸;多重序列比对发现犬弓首蛔虫的黏蛋白均具有SKhT保守结构域,且含有不同串联重复序列组成的黏蛋白结构域;种系发育分析结果显示与猪蛔虫进化关系较近;SDS-PAGE结果表明重组蛋白Tc-MUC-2相对分子质量为7.5×104,以可溶性形式表达;利用Ni-NTA亲和层析柱纯化蛋白,以250 mmol/L咪唑进行洗脱时可获得高纯度目的蛋白;将纯化后的重组蛋白免疫新西兰大白兔以制备多克隆抗体,间接ELISA结果显示其多克隆抗体效价大于1:512000,表明重组蛋白的免疫原性较好,SDS-PAGE结果显示纯化后的抗体纯度高于95％,Western Blot结果显示抗体能与Tc-MUC-2蛋白特异性结合,表明抗体特异性高.

贾红菓、谭纯、王冰楠、梅四鹏、孙雪、杨晓伟、周荣琼

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西南大学动物医学院,重庆荣昌 402460

犬弓首蛔虫 黏蛋白2 克隆 原核表达 多克隆抗体

重庆市自然科学基金中央高校基本科研业务费专项

cstc2019jcyjmsxm2338XDJK2020RC001

2023

10.13718/j.cnki.xdzk.2023.01.007

西南大学学报(自然科学版)
西南大学学报编辑部

西南大学学报(自然科学版)

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.825
ISSN：1673-9868
年,卷(期)：2023.45(1)
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