目的 研究注射用丹参多酚酸(Salvianolate Lyophilized Injection,SLI)对氧糖剥夺/再灌注(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)损伤小鼠脑神经瘤细胞株Neuro-2a的保护作用及机制.方法 体外培养Neuro-2a细胞,建立OGD/R损伤模型,给予SLI(10、25、50 μg/mL)以及自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)干预,检测SLI对OGD/R损伤Neuro-2a细胞存活率、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出量及细胞色素C(cytochrome C,Cyt-C)的释放;采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;采用Western blotting法检测凋亡及自噬相关蛋白的表达情况.结果 与OGD/R组比较,SLI显著提高OGD4h/R24hNeuro-2a细胞存活率(P＜0.05、0.01),降低LDH漏出量(P＜0.05、0.01),抑制细胞凋亡和细胞内Cyt-C释放(P＜0.05、0.01),调节活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleavedcystein-asparateprotease,cleaved Caspase-3)、B 淋巴细胞瘤 2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白表达(P＜0.05、0.01).SLI 还可以增加 OGD4h/R6h 细胞自噬相关蛋白微管相关蛋白 1 轻链 3Ⅱ(microtubule-associatedprotein 1 light chain 3Ⅱ,LC3II)、自噬效应蛋白(Beclin-1)表达(P＜0.05、0.01),减少自噬选择性底物p62蓄积(P＜0.05、0.01).加入自噬抑制剂,可以抵消SLI对OGD/R损伤Neuro-2a细胞的保护及凋亡抑制作用.此外,SLI可以降低磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-Akt)水平以及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)表达(P＜0.05、0.01),介导细胞自噬的发生.结论 SLI对OGD/R损伤后的Neuro-2a细胞具有保护作用,其机制可能是通过调节Akt/mTOR信号通路介导的细胞自噬,进而发挥抑制细胞凋亡的作用.
NETL
NSTL
维普
万方数据
